基于CreER-LoxP系统的靶基因失活：一种在小鼠模型中实现靶基因敲除的他莫昔芬诱导型Cre重组酶系统

摘要

来源：Hubner, E. K., 等 组成型与诱导型基因表达系统 在体实验 通过水动力尾静脉注射法修饰小鼠肝细胞 视频实验杂志 (2018)

本视频介绍了一种在小鼠模型中通过腹腔注射他莫昔芬，利用他莫昔芬诱导型Cre重组酶系统实现目的基因敲除的实验方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 使用他莫昔芬诱导转染的 CreER

注意：他莫昔芬有害，可能致癌或损害生育能力。请参阅安全数据表。

1. 计划在连续三天内进行腹腔注射他莫昔芬。
2. 第1天，将10 mg他莫昔芬溶解于40 µL乙醇中。在55 °C下孵育10分钟，期间多次涡旋震荡，直至他莫昔芬完全溶解。
3. 加入960 µL玉米油，在55 °C下继续孵育5分钟，多次涡旋震荡，直至形成澄清溶液。
4. 用1-mL胰岛素注射器配27 G针头吸取溶液，准备注射。
5. 用拇指和食指轻轻抓起小鼠颈背部皮肤固定，将尾巴置于手掌根部与无名指和小指之间以固定体位。
6. 将0.1 mL（含1 mg他莫昔芬）溶液注射至小鼠腹部左下象限的腹腔内。
7. 在第2天和第3天重复上述注射操作。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1 ml 注射器	Braun	9166017V	用于腹腔注射
他莫昔芬	Sigma-Aldrich	T5648-1G	用于 CreER 激活
玉米油	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	作为他莫昔芬注射的载体