基于可诱导 Tet-On 调控系统的体内基因表达：小鼠模型中四环素诱导的目标基因转录激活系统

摘要

来源：Hubner, E. K. 等  组成型与诱导型基因表达系统 体内 通过水动力尾静脉注射法修饰小鼠肝细胞 视频实验杂志 (2018)

本视频展示了在小鼠模型中使用四环素（Tet-On）基因表达系统。在多西环素（一种四环素衍生物）存在的情况下，Tet-On 系统中的反向四环素调控转录激活蛋白被激活，从而表达目的基因。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 四环素依赖性基因或shRNA表达的诱导

注意：多西环素可能有害。请参阅安全数据表。

注意： 根据实验的类型和持续时间，可将多西环素通过饮水方式给予。

1. 对于短期实验（<10 天），通过饮水方式给予小鼠多西环素，具体方案如下。
   1. 将 5 g 蔗糖溶解于 100 mL 自来水中，高压灭菌。
   2. 在 15 mL 圆锥形离心管中，将 100 mg 盐酸多西环素溶解于 5 mL 蔗糖溶液（步骤 1.1.1）中。
   3. 使用 10 mL 注射器，通过 0.2 µm 滤膜对溶液进行无菌过滤，然后加入步骤 1.1.1 中配制的蔗糖溶液中。
   4. 将含多西环素的蔗糖溶液作为小鼠的饮用水提供。每日检查，若溶液变浑浊（提示细菌过度生长）则立即更换；即使溶液澄清，最迟也应在三天后更换。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
D(+)-蔗糖	Carl Roth	4621.1	用于多西环素溶液的甜味剂
盐酸多西环素	AppliChem	A2951,0025	激活四环素依赖性表达
Injekt 10 ml 注射器	Braun	4606108V
Filtropur S 0.2	Sarstedt	831.826.001	用于多西环素溶液的过滤