拟南芥植物中基于二元细菌人工染色体载体的基因转化:一种通过单拷贝插入生成转基因植物的技术

Abstract

来源:Tark-Dame， M. 等人。使用 BIBAC-GW 二元载体生成具有单拷贝插入的转基因植物。J. Vis. Exp.（2018 年）。

在本视频中，我们演示了通过农杆菌介导的基于农杆菌人工染色体的基因转化表达稳定转基因的转基因拟南芥植物的产生。

Protocol

1.拟 南 芥转型

1. 准备拟南芥植物进行转化。
   1. 在温室或气候控制的生长室中种植拟南芥植物，直到它们开花（12 个花盆，每个盆 9
   株）。
   2. 夹住第一个螺栓以允许更多次级螺栓出现。植物在剪下后 4-6 天就可以浸泡了，此时植物有许多未成熟的花头，没有很多受精的角果。
2. 花香蘸酱
   1. 在携带用二元细菌人工染色体或 BIBAC 克隆的 T-DNA 的农杆菌悬浮液中浸入花序 5-10 秒。使用温和的搅动。
   2. 用保鲜膜包裹植物的地上部分以保持高湿度，并用盒子盖住花盆，让植物在黑暗中保持。将植物在温室/生长室中孵育 2 天。
   3. 取下盒子和保鲜膜，在温室/生长室中将植物生长至成熟。
      注意:为了提高转化效率，相同的植物可以在第一次浸渍后 7 天重新浸渍。
   4. 收获种子。汇集并分析植物的种子 （T1），用相同的构建体转化，作为一组。
3. 筛选转基因植物。
   1. 为了筛选用 pBIBAC-RFP-GW 衍生物转化的转基因植物，请使用荧光显微镜分析种子。为了检测种皮中的 DsRed 表达，在 560 nm 激发和 600-650 nm 发射下对种子进....

Results

图 1:草铵膦 - 铵处理前后装满拟南芥幼苗的托盘。不表达存在于 pBIBAC-BAR-GW T-DNA 中的 bar 基因的幼苗在喷洒草铵膦-铵溶液后死亡。照片显示了同一盘幼苗 （A） 喷洒草铵膦前、播种后 14 天和 （B） 喷洒 10 天后，喷洒两次后。

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Materials