基于磁转染的体外转染：一种利用磁性纳米颗粒在磁场辅助下将质粒递送至原代小鼠神经元细胞的技术

摘要

来源：Jacquier, A. 等 模拟夏科-马里-图斯病 体外 通过转染小鼠原代运动神经元 J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们展示了在原代神经元细胞培养中进行磁引导转染质粒DNA的方法。磁转染技术利用外部磁场，将结合在磁性纳米颗粒上的质粒引导至细胞质中。

方案

1. 多聚鸟氨酸/层粘连蛋白（Po/L）培养皿包被

注意：体积量已调整为适用于包被24孔板。

1. 如有需要，将无菌的12 mm盖玻片放入孔中。
2. 用500 µL溶于水的10 µg/mL多聚-L-鸟氨酸溶液包被各孔。
3. 室温静置1小时。
4. 吸除多聚-L-鸟氨酸溶液，室温晾干30分钟。
5. 加入500 µL含3 µg/mL层粘连蛋白的碳酸氢盐L-15培养基，37 °C孵育过夜。
   注意：包被后的孔可在37 °C培养箱中保存7天。对于长时间孵育，可在孔之间加入无菌PBS，以减少培养基蒸发。

2. 运动神经元培养

1. 将运动神经元（MNs）稀释至适当密度，通常在24孔板中每孔加入500 µL培养基，含5,000至10,000个细胞。
   注意：6孔板和96孔板的接种密度分别约为30,000和1,500个细胞。
2. 使用P1000移液器吸除层粘连蛋白（laminin）溶液。
3. 立即将稀释于培养基中的运动神经元（MNs）转移至包被好的培养板中，避免干燥。
4. 在37 °C条....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
质粒 pCAGEN	Addgene	#11160
神经元细胞培养基	ThermoFisher Scientific	A3582901	Neurobasal Plus 培养基
多聚-DL-鸟氨酸	Sigma-Aldrich	P8638
层粘连蛋白	Sigma-Aldrich	L2020
碳酸氢钠	ThermoFisher Scientific	25080094
L-15 培养基	ThermoFisher Scientific	11415056
PBS（无 Ca、Mg）	ThermoFisher Scientific	14190144	不含 Mg²⁺、Ca²⁺
圆形盖玻片	NeuVitro, Knittel glass	GG-12-Pre	12 mm