TEM 网格上病毒样品的基于胶囊的阴性染色:一种可视化包膜病毒超微结构的重金属染色技术

摘要

来源:Blancett， C. D. 等人。利用胶囊对生物防护中的病毒样本进行负染色。J. Vis. Exp.（2017 年）

在本视频中，我们演示了在生物防护环境中使用处理胶囊对包膜病毒样本进行负染色。可以使用透射电子显微镜对负染色的病毒进行可视化，以纳米分辨率研究病毒的结构和形态。

方案

1. 在 BSL-2 实验室中用 2% 戊二醛在生物安全防护中灭活的胶囊法，然后在 BSL-2 实验室中进行阴性染色

1. 病毒灭活程序。
   1. 在生物防护 BSC 内，将病毒悬浮液与相同体积的 4% 戊二醛充分混合，以达到 2% 戊二醛的最终浓度><。 谨慎:戊二醛是一种危险化学品，需要适当的保护。戊二醛可以在普通 BSC 中短暂使用，但扩展开放试剂需要在管道式 BSC 或化学通风橱中工作。
   2. 在包装、去污并将其转移到 BSL-2 EM 设施之前，用固定剂灭活病毒至少 24 小时。
2. 在 BSL-2 EM 设施中，将病毒和固定剂混合物吸入胶囊中，胶囊包含两个 TEM 网格，连接到移液管上。
3. 将移液管水平放置 10 分钟，网格水平放置。
   注意:这是为了促进病毒颗粒均匀分布在 TEM 网格上。
4. 拿起移液器并按下柱塞，将病毒排出到废物容器中。将 40 μL dI 水吸入胶囊中，然后将其排放到废液容器中，进行 3 次冲洗循环。
5. 将 40 μL 1% 乙酸铀酰 （UA） 或 1% 磷钨酸钾 （PTA） 吸入胶囊中 30 s.
   注意:染色时间从 10 秒到 1 分钟不等，具体取决于病毒样本。
   谨慎:UA 是一种 α 发射器，也是一种累积毒素。用适当的保护来处理它。
6. 从移液管中取出胶囊，将网格的边缘接触一张滤纸，吸干网格。风干网格并储存它们以备后续 TEM 成像。

材料