软组织样品的曙红染色:一种基于曙红的小鼠全肾染色程序，用于可视化特定组织微结构

摘要

来源:Busse， M. et al.， 3D 使用 X 射线特异性染色法和纳米计算机断层扫描对软组织样本进行成像。J. Vis. Exp.（2019 年）

该视频演示了固定后曙红 Y 染色对小鼠整个肾脏进行酸化的过程。这种细胞质特异性曙红染色方法有助于可视化和识别组织中的解剖结构。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 曙红染色方案

1. 要固定软组织样品，请在 50 mL 离心管中加入含有 9.5 mL 4% （v/v） 甲醛溶液 （FA） 和 0.5 mL 冰醋酸 （AA） 的固定液><。 注意:从用大约 10% 甲醇稳定的 37% 无酸 FA 溶液中新鲜制备 FA 溶液。用 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 （DPBS） 进一步稀释 FA 溶液。选择不含钙和镁的 DPBS。将稀释的 FA 溶液保存不超过一个月。在酸化过程中，固定液的 pH 值从中性变为约 3.
   谨慎:由于 FA 具有急性器官毒性、腐蚀性和致癌性，因此必须使用通风柜，并且必须使用适当的个人防护设备。
   1. 将新鲜取出的软组织样品添加到 50 mL 离心管中，并将 50 mL 离心管冷藏 24-72 小时。
      注意:该协议可以在此处暂停。
   2. 用 DPBS 溶液洗涤软组织样品 1 小时。
2. 要对固定的软组织样品（例如，整个小鼠肾脏）进行染色，请将软组织放入 2 mL 的伊红 Y 染色溶液中，并孵育样品 24 小时。在孵育过程中，将样品放在水平摇动板上，以实现平稳摇动（约 60 rpm><）。 注意:伊红 Y 染色溶液在蒸馏水中浓度为 30% （w/v）。选择染色溶液的体积，使样品完全被染色溶液覆盖，并允许样品在样品容器内自由移动。其他样品的孵育时间可能不同，必须进行相应调整。
3. 染色后，小心地从样品容器中取出软组织样品。
   1. 用纤维素薄纸小心去除多余的染色剂。
   2. 将软组织样品放入乙醇气相上方的锥形样品容器中，以便储存和进一步使用><。 注意:锥形样品容器的试管底部必须始终含有几滴 70% （v/v） 乙醇，以保持软组织样品湿润并防止伪影。

材料