石蜡包埋组织切片的苏木精-伊红染色：利用苏木精与伊红染料组合对肝组织切片进行可视化的差异染色技术

摘要

来源：Ellis, J. L 等，斑马鱼急性酒精性肝损伤的组织学分析，J. Vis. Exp. (2017)。

在本视频中，我们介绍了一种对石蜡包埋的组织切片进行苏木精-伊红染色以研究其组织学结构的技术。该操作步骤包括对组织进行脱蜡，随后对组织中的细胞进行染色。染色后，细胞核呈明显的蓝色，而细胞质中的蛋白质则呈现粉红色。

方案

1. 染色液的配制

1. 过滤苏木精原液，以去除已析出的任何固体。
2. 将咖啡滤纸对折，使其形成一个圆锥形。打开侧面接缝，使液体流过滤纸，从而截留任何杂质。
3. 将滤纸放入漏斗中，并将漏斗置于玻璃培养液瓶上。缓慢将苏木精原液倒入漏斗中。
   注意：苏木精在接触眼睛、摄入或吸入时具有危害性。操作原液时务必穿戴实验服和手套，并在化学通风橱中进行。
4. 通过将125 µL的12 N HCl加入250 mL的ddH₂O中，配制0.05% HCl溶液。
5. 在玻璃瓶中混合25 mL 1%伊红Y（水溶液）、2.5 mL 1%荧光红B（水溶液）、195 mL 95%乙醇和1 mL冰醋酸，配制伊红Y-荧光红B溶液混合液。轻轻旋转混匀，并在室温下保存。
   注意：伊红Y在接触眼睛、摄入或吸入时具有危害性。操作原液时务必穿戴实验服和手套，并在化学通风橱中进行。
6. 通过将2 mL纯乙醇加入98 mL蛋水中，配制2%乙醇溶液。
   注意：乙醇对眼睛具有刺激性。操作乙醇时务必佩戴适当的个人防护装备。乙醇还具有易燃性，应相应地进行操作和储存。
   注：每次进行急性乙醇处理前，均需新鲜配制2%乙醇溶液。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
95% 乙醇 (EtOH)	Decon Labs, Inc.	2801	易燃
带电荷的载玻片	Fisher Scientific	12-550-16
解剖显微镜	Leica Biosystems	Leica Mz 95
伊红-品红染色剂套装	Newcomer Supply	1082A
乙醇	Sigma-Aldrich	E7023	易燃
哈里斯苏木精	Poly Scientific R&D Corp.	s212	刺激性
盐酸 (HCl)	Fisher Scientific	A144	刺激性
异丙醇	Newcomer Supply	12094E	易燃
二甲苯	Fisher Scientific	X3S-4	刺激性