甲苯胺蓝染色法用于周围神经切片：一种染色有髓神经纤维以观察周围神经结构的技术

摘要

来源：Ghnenis, A. B. 等，甲苯胺蓝染色法用于评估周围神经形态的树脂包埋切片分析 J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了使用甲苯胺蓝对经树脂包埋并用四氧化锇处理的大鼠周围神经切片进行染色的技术。染色后的神经切片有助于观察周围神经的细微结构。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 甲苯胺蓝染色

1. 通过将2 g硼砂溶解于100 mL去离子水中，配制1%的甲苯胺蓝溶液，然后加入1 g甲苯胺蓝，搅拌至完全溶解。使用滤纸（孔径：11 µm）过滤该溶液，并将溶液置于不透光瓶中，室温保存，最多可使用两周。
2. 使用塑料移液管或微量移液器，在神经组织切片表面滴加一滴甲苯胺蓝溶液，静置20–30秒。
3. 将载玻片轻轻浸入去离子水容器中，冲洗掉多余的甲苯胺蓝溶液，重复3–4次，直至切片清晰。将载玻片在60 °C下干燥至少15分钟，或在室温下过夜干燥，然后使用常规封片介质加盖盖玻片。制备完成后应立即观察，或于室温下保存。
4. 在光学显微镜下观察。建议使用100倍油镜观察用于计算g比值的详细图像。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
甲苯胺蓝 O	Sigma-Aldrich	T3260
十水合四硼酸钠	Acros Organics	205950010
显微镜盖玻片	Fisher Scientific	12545102
VWR 显微载玻片，Superfrost Plus	VWR	48311-703
100 瓦烘箱	Millipore	6350115
Whatman 滤纸	Sigma-Aldrich	WHA10010155
Olympus 荧光显微镜			双 CCD 彩色与黑白相机，DP80
3 mL 塑料移液管	Sigma-Aldrich	Z331740