组织切片的焦油紫染色：一种用于可视化小鼠胚胎冷冻切片中软骨和骨骼的染色方法

摘要

来源：Wu, Meng，等，激光捕获显微切割小鼠胚胎软骨与骨骼用于基因表达分析。J. Vis. Exp. (2019)

本视频介绍了使用焦油紫染色法对冷冻小鼠胚胎冠状切片中的骨骼和软骨进行染色的实验步骤。该染色技术有助于将骨骼和软骨与周围组织区分开来，并以不同的颜色清晰呈现。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 激光显微切割样品制备

1. 准备染色和脱水用的溶液。
   1. 在冰上放置三个50 mL离心管，每个管中加入45 mL 80%乙醇。标记为#1、#2和#3。用无RNase/DNase的水稀释乙醇。
   2. 在冰上放置一个50 mL离心管，其中加入45 mL 95%乙醇。
   3. 在冰上放置一个50 mL离心管，其中加入45 mL 100%乙醇。
   4. 在室温下放置一个50 mL离心管，其中加入45 mL二甲苯。
      注意： 二甲苯应在通风橱中使用。
2. 将PEN膜载玻片短暂地贴于戴手套的手上以解冻，然后在50 mL离心管中用45 mL 80%乙醇（#1和#2）振荡洗涤两次，每次30秒，以去除OCT包埋剂。
   注意： 染色前必须彻底去除OCT，以防止染色过程中OCT松动而遮蔽组织切片。可使用镊子辅助去除振荡无法洗净的OCT。
3. 将载玻片平放在铝箔纸上。用移液器将0.8 mL 0.1%焦油紫（溶于50%乙醇）滴加到载玻片上，染色30秒。随后在45 mL 80%乙醇（#3）中清洗30秒，再依次通过含45 mL 95%乙醇、100%乙醇和二甲苯的50 mL离心管各30秒进行脱水。
4. 将载玻片竖立在精细擦拭纸上静置5分钟，以沥干二甲苯并干燥组织切片。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
离心管	ThermoFisher Scientific	339653	50 mL 锥形无菌聚丙烯离心管
醋酸克雷斯紫	Sigma-Aldrich	C5042
精密擦拭纸	ThermoFisher Scientific	06-666
蒸馏水	Invitrogen	10977-015	无 DNase/RNase
无水乙醇（200 proof）	ThermoFisher Scientific	BP2818	分子生物学级
玻璃 PEN 膜载玻片	Leica Microsystems	11505158
OCT 包埋剂	Electron Microscopy Sciences	102094-106
RNase 去污染剂	Sigma-Aldrich	R2020	用于表面清洁的 RNase 去污染剂
二甲苯	Sigma-Aldrich	214736