组织切片的甲酚紫染色:一种在冷冻小鼠胚胎切片中可视化软骨和骨骼的染色程序

摘要

来源:Wu， Meng， et al.， 激光捕获小鼠胚胎软骨和骨骼显微解剖用于基因表达分析。J. Vis. Exp.（2019 年）

该视频描述了甲酚紫染色程序，以可视化冷冻小鼠胚胎冠状切片中的骨骼和软骨。这种染色技术有助于区分颜色不同的骨骼和软骨与周围组织。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 激光捕获显微切割的样品制备

1. 准备染色和脱水溶液。
   1. 将 45 mL 80% 乙醇放入三个 50 mL 离心管中，每个离心管置于冰上。将它们标记为 #1、#2 和 #3。用不含 RNase/DNase 的水稀释乙醇。
   2. 将 45 mL 95% 乙醇放入冰上的 50 mL 离心管中。
   3. 将 45 mL 100% 乙醇放入冰上的 50 mL 离心管中。
   4. 在室温下将 45 mL 二甲苯放入 50 mL 离心管中><。 注意: 二甲苯应在通风橱中使用。
将
2. PEN 膜载玻片靠在戴手套的手上短暂解冻，然后在 45 mL 80% 乙醇（#1 和 #2）中洗涤两次，每次 30 秒，并在 50 mL 离心管中搅拌以去除 OCT.
   注意:染色前去除 OCT 很重要，以防止染色过程中 OCT 松动而遮挡切片。镊子可用于促进去除未被搅拌冲走的 OCT。
3. 将载玻片放在一块铝箔上。将 0.8 mL 的 0.1% 甲酚紫在 50% 乙醇中移液到载玻片上并染色 30 秒。在 45 mL 80% 乙醇 （#3） 中洗涤载玻片 30 秒，然后在 50 mL 离心管中通过 45 mL 95% 乙醇、100% 乙醇和二甲苯各传代 30 秒脱水。
4. 将载玻片放在精密的任务刮水器上 5 分钟，以排出二甲苯和干燥切片。

材料