幼虫 Drosophila 油细胞中的脂滴染色：利用基于BODIPY的染料在正常与应激条件下评估脂滴积累的技术

摘要

来源：Wei, C., 等 Oenocytes 的解剖与脂滴染色 果蝇 幼虫。 视频实验杂志 (2019).

本视频展示了利用亲脂性荧光染料 BODIPY 对果蝇（Drosophila）幼虫的类肝细胞——oenocytes 中的脂滴进行染色的方法。这些细胞可作为研究发育过程中以及应对饥饿等环境应激条件下脂质代谢的模型。

方案

1. 幼虫的饥饿处理

注意： 在正常饲养条件下，三龄幼虫的细胞中几乎检测不到或完全没有脂滴；但在饥饿等应激条件下，可在细胞中诱导产生大量大型脂滴。为了进一步验证该方法，有必要对幼虫进行预处理，以诱导细胞中脂滴的生成。本实验选用12小时、24小时和36小时的饥饿时间进程作为范例。特别地，短期饥饿（例如3小时）已足以在细胞中诱导出可检测的脂滴。饥饿持续时间可根据具体的实验目的和条件进行调整。

1. 制备饥饿处理和对照处理的实验腔室。
   1. 对于饥饿处理腔室：将适当大小的滤纸放入6 cm的培养皿中，并用移液器加入1 mL PBS至滤纸上。
   2. 对于对照处理腔室：在培养皿中加入5 mL 布卢明顿标准玉米粉培养基。
2. 使用解剖刀轻轻刮取含有仍埋在食物中的幼虫的上层培养基，并将其转移至盛有5 mL PBS的培养皿中。在PBS中轻轻搅动幼虫，以去除幼虫体表的食物残留，尽可能使其清洁。
3. 使用小号毛笔挑选40只大小相近的三龄幼虫，随机均分为两组，每组20只，分别放入饥饿处理组和对照组的腔室中。
4. 将实验腔室置于25 °C、60%湿度的培养箱中，分别进行12 h、24 h和36 h的处理。
   注意： 对于饥饿处理组中的幼虫，每12 h补....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
50 mL 离心管	Corning	430829	50 mL
6 cm 培养皿	Thermo Fisher	150326	6 cm
琼脂			用于果蝇食物
铝箔	N/A	N/A	防止样品见光
BODIPY 493/503	Invitrogen	D3922	脂滴染色染料
共聚焦显微镜	Leica	Leica TSC SP5	共聚焦成像
玉米糖浆			用于果蝇食物
玉米粉			用于果蝇食物
盖玻片	Citoglas	10212424C	20 × 20 mm，厚度 0.13–0.17
解剖针	N/A	N/A
解剖板	N/A	N/A
滤纸	N/A	N/A	直径：11 cm
固定缓冲液	N/A	N/A	含 4% 多聚甲醛（PFA）的 1× PBS
镊子	Dumont	11252-30	#5
培养箱	Jiangnan	SPX-380	用于果蝇培养
微量离心管	Axygen	MCT-150-C	1.5 mL
载玻片	Citoglas	10127105P-G
封片介质	VECTASHIELD 抗荧光淬灭封片 介质	H-1000	抗荧光淬灭封片介质
指甲油	PanEra	AAPR419	密封盖玻片
画笔	N/A	N/A
PBS	N/A	N/A	1× PBS（137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na_{2} HPO_{4}，1.8 mM KH_{2} PO_{4}，pH 7.4）
旋转仪	Kylin-Bell Lab Instruments	WH-986
剪刀	Smartdata Medical	SR81	Vannas 弹簧剪
大豆粉			用于果蝇食物
药匙	N/A	N/A
标准玉米粉培养基	N/A	N/A	根据布卢明顿标准 玉米粉培养基配方
体视显微镜	Leica	Leica S6E	用于组织解剖
擦拭纸	N/A	N/A
酵母			用于果蝇食物