大鼠脑组织切片的TTC染色：一种用于区分缺血-再灌注损伤后组织切片中存活与坏死组织的染色方法 TTC染色，大鼠脑组织，缺血-再灌注损伤，组织切片，坏死组织，存活组织

摘要

来源：Liepinsh, E., 等. 缺血-再灌注后啮齿类动物心脏和脑组织用于数字宏观摄影的制备. J. Vis. Exp. (2022)

本视频介绍了使用2,3,5-三苯基-2H-四氮唑氯化物染色法对大鼠脑组织切片进行染色的实验步骤，用于在大脑中动脉闭塞及再灌注后可视化脑组织切片，并区分存活组织与受损组织。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 脑组织染色与切片

1. 大脑中动脉阻塞实验后，从颅骨中取出包括脑干在内的整个脑组织，并用冰冷的 PBS 洗涤。
2. 根据动物体重选择合适尺寸的不锈钢脑组织切片模具（见材料表）（图1B）。将脑组织腹面朝上放置于切片模具中。
   注意：脑组织放入模具后，其腹面必须与模具顶面保持平行。
3. 使用刀片从两侧（前后两端各插入两片刀片）固定脑组织的前部和后部。
   注意：必须使用与切片模具兼容的剃须刀片。通常可使用兼容的单边刃刀片（厚度不超过 0.01 英寸（0.254 mm））进行大鼠脑组织切片。
4. 将刀片部分插入（不要完全切断脑组织）第一片与最后一片刀片之间的槽道中。当所有刀片均插入并平行排列后，用手掌同时下压所有刀片，将脑组织切成 2 mm 厚的冠状切片。
5. 用两根手指牢固地夹住刀片两侧，将刀片连同已切好的脑组织一起从模具中取出。
6. 将脑切片逐一排列在托盘（70 mL，72 × 72 mm）中。排列时确保每片切片的前部表面始终朝上。
7. 将预热的（+37 °C）1% TTC PBS 溶液倒在脑切片上，于 37 °C 避光孵育 8 分钟。
   注意：孵育过程中脑切片必须完全浸没在 TTC 溶液中。
8. 在 1% TTC 溶液中孵育后，将脑切片转移至蓝色塑料托盘中进行成像。按从前到后的顺序依次排列脑切片，并使用解剖刀沿矢状面分离左右半球。

结果

图 1： 大鼠心脏和脑切片用模具。 （A）大鼠心脏，（B）大鼠脑。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）	Sigma-Aldrich	298-96-4
成年大鼠脑切片矩阵	Zivic Instruments	BSRAS001-1
单刃剃刀刀片	Zivic Instruments	BLADE012.1
索尼 Alpha a6000 无反数码相机	Sony	ILCE6000	可使用任何较新型的数码相机替代
手术刀片	Heinz Herenz Hamburg Germany	BS2982
称量盘，70 mL	Sarsted	71,99,23,212
恒温振荡器	BioSan	PST-60HL-4
齿状组织镊	Agnthos	11021-12
氯化钠	Fisher bioreagents	BP358-10
弯头盖玻片镊	Fine Science Tools	11073-10