聚丙烯酰胺凝胶中硫酸化糖胺聚糖的银染：一种用于可视化硫酸化糖胺聚糖的染色方法

摘要

来源：LaRiviere, W. B.，等。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测糖胺聚糖。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们演示了一种联合使用阿尔新蓝和银染法对硫酸化糖胺聚糖寡糖片段进行染色的实验步骤。这种联合染色技术可显著增强聚丙烯酰胺凝胶中不同长度糖胺聚糖聚合物条带的显色效果。

方案

1. 银染实验方案

1. 提前准备好银染所需的所有溶液（表1）。
   注意：在凝胶完成染色、显影并放入终止液之前，请勿直接用手接触PAGE凝胶。应使用洁净的塑料或玻璃工具操作凝胶。直接用手接触会导致指纹污染及其他可见的人工假象。
2. 电泳结束后，将凝胶夹板拆开，并将凝胶转移至一个洁净的中等偏大容器中，容器内盛有去离子过滤水。
   注意：为避免直接接触凝胶，可在水中使用移液器吸头或其他塑料工具轻轻将凝胶从夹板上剥离。凝胶可能较脆弱，请小心操作。
   1. 弃去水溶液。将凝胶置于阿尔新蓝染色液中染色5分钟。
   2. 弃去阿尔新蓝染色液。用去离子过滤水快速冲洗/洗涤2–3次，直至大部分阿尔新蓝染色液被去除。
   3. 将凝胶置于去离子过滤水中，在摇床中过夜脱色。确保使用足量的去离子过滤水，以保证残留染料在过夜过程中被彻底洗脱。
   4. 用50%甲醇洗涤凝胶（共40分钟，期间更换溶液2–3次）。
   5. 用去离子过滤水洗涤凝胶30分钟。弃去水后重复此步骤3次，总计洗涤2小时，每次均更换新水。
   6. 在干净的新容器中，将凝胶置于硝酸银染色液中染色30分钟。
   7. 用去离子过滤水快速冲洗/洗涤2–3次，彻底去除硝酸银染色液。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Alcian Blue 8GX（固体）	ThermoFisher Scientific	AC400460100
氢氧化铵（液体）	ThermoFisher Scientific	A669S-500	符合ACS认证标准
Barnstead GenPure Pro 水纯化系统	ThermoFisher Scientific	10-451-217PKG	任何去离子/水纯化系统均可作为替代
冰乙酸（液体）	ThermoFisher Scientific	A35-500	符合ACS认证标准
甲醇（液体）	ThermoFisher Scientific	A412-500	符合ACS认证标准
硝酸银（固体）	ThermoFisher Scientific	S181-25	符合ACS认证标准
氢氧化钠（固体）	ThermoFisher Scientific	S392-212
真空滤器单元，一次性使用，PES膜，孔径0.22 µm，体积500 mL	ThermoFisher Scientific	569-0020	其他体积规格和滤膜材料亦可接受
Molecular Imager Gel Doc XR 成像系统	Bio-Rad	170-8170	任何性能相当的凝胶成像系统均可作为替代