1. 马松-戈德纳三色染色法
<ol>
	<li>使用手动切片机从石蜡包埋的心脏组织块制备组织切片（厚度：5 µm）。</li>
	<li>对每只大鼠每个心脏部位取一张切片进行Masson-Goldner三色染色（每张载玻片包含3 - 4个横切面）。
	<ol>
		<li>将载玻片置于60 °C烘箱中熔化。在通风橱内，先后两次用二甲苯脱蜡，每次10分钟。再依次在100%乙醇、95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中各浸泡3分钟进行水化。</li>
		<li>用Bouin液固定过夜。随后，在流动自来水下冲洗10 - 15分钟，再用蒸馏水冲洗。然后在Mayer苏木精染液中孵育3分钟。</li>
		<li>取出载玻片，在蒸馏水中放置5分钟。接着在酸性品红-ponceau染液中孵育5分钟，再用1%乙酸冲洗1分钟。</li>
		<li>随后在磷钼酸-橙G染液中孵育1分钟，用1%乙酸冲洗1分钟，再在亮绿染液中孵育10分钟，最后再次用1%乙酸冲洗1分钟。</li>
		<li>依次在70%乙醇（30秒）、95%乙醇（30秒）和100%乙醇（5分钟）中脱水。在组织切片上滴加一滴树脂封片剂，加盖盖玻片，静置干燥。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>迈耶苏木精</td><td>MHS32-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>酸性品红 CI 42685</td><td>F8129-50G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ponceau 木素 CI 16150</td><td>P2395-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>橙黄 G CI 16230</td><td>O3756-100G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>亮绿 CI 42095</td><td>L5382-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>10315083</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇</td><td>10303990</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>SM2800</td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>甲醛</td><td>99340</td><td>Reactolab</td><td></td></tr><tr><td>包埋盒</td><td>K113.1</td><td>Carl Roth</td><td></td></tr><tr><td>Bersoft 图像测量软件</td><td></td><td>Bersoft.com</td><td>授权软件</td></tr></tbody></table>

masson goldner 三色染色：一种用于心血管纤维化检测的心脏组织切片中胶原蛋白可视化技术

Masson Goldner Trichrome Staining: A Technique to Visualize Collagen in Heart Sections for Cardiovascular Fibrosis Detection

来源：Valentin, J.，等。<a href='https://www.jove.com/v/54914'>大鼠慢性心肌梗死的组织学定量分析</a>。&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2016)。&#160;
本视频展示了心脏组织中胶原纤维、细胞核和细胞质的差异染色，以观察与心脏病理相关的纤维化生长。

Masson Goldner 三色染色：一种用于心血管纤维化检测的心脏组织切片中胶原蛋白可视化技术

来源：Valentin, J. 等。大鼠慢性心肌梗死的组织学定量分析。《视觉化实验杂志》（2016）。  
本视频……

应激激活的心脏成纤维细胞在损伤区域沉积过量胶原蛋白，这种状况称为纤维化，会损害心脏功能。
为了观察纤维化的程度，首先对石蜡包埋的心脏组织块进行切片。将切片置于载玻片上。加热载玻片以熔化石蜡，使组织切片贴附牢固。
将切片浸入二甲苯中以脱去组织中的石蜡。用梯度递减的酒精处理切片，使其重新水化，并有助于后续水溶性染色剂成分的结合。
将切片置于酸性固定剂中孵育，该固定剂可交联蛋白质，从而稳定组织结构。用清水冲洗以去除残留的固定剂。
将玻片浸入苏木精溶液中。阳离子染料与带负电荷的DNA结合，使细胞核染成蓝色。用清水冲洗以去除多余的染料。
将切片置于酸性品红-丽春红（acid Fuchsin-Ponceau）中孵育，该试剂是一种小分子阴离子染料，可与带正电荷的胞质蛋白和胶原蛋白结合，使其染成红色。随后用稀释的乙酸处理，以去除多余的染料。
将切片浸入磷钼酸-橙G溶液中。橙G是一种小分子染料，可将红细胞染成橙红色。磷钼酸是一种大分子酸，能将小分子染料从胶原蛋白中排出，使其呈无色。&#160;
将切片置于浅绿色染料中孵育，该染料分子可结合胶原纤维，使其呈现绿色。在显微镜下，纤维化区域呈绿色，表明存在过量的胶原沉积。

在此步骤中，使用手动切片机从石蜡包埋块制备五微米厚的组织切片。随后，对每只大鼠的每份心脏切片各染色一张载玻片，采用马松-戈德纳三色染色法。对于石蜡切片，先在60摄氏度的烘箱中将组织融化。在通风橱内，用二甲苯脱蜡两次，每次10分钟。
然后，依次在100%乙醇、95%乙醇、70%乙醇中各重水化3分钟，最后在蒸馏水中浸泡3分钟。对于脱蜡的切片以及冷冻切片，用Bouin溶液固定过夜。次日早晨，用流动的自来水冲洗10至15分钟，再用蒸馏水冲洗一次。
使用Bouin液固定是确保获得理想Goldner染色结果的最重要步骤。
将切片置于 Mayer 苏木精染液中孵育 3 分钟。3 分钟后取出切片，放入蒸馏水中浸泡 5 分钟。随后将切片置于丽春红-酸性品红染液中孵育 5 分钟，再用 1% 乙酸溶液冲洗 1 分钟。
接着，将切片置于磷钼酸橙G中孵育1分钟，然后用1%乙酸冲洗1分钟。再将切片置于亮绿染液中孵育10分钟，随后用1%乙酸冲洗1分钟。最后，依次用70%乙醇脱水30秒、95%乙醇脱水30秒、100%乙醇脱水5分钟。在组织切片上滴加一滴树脂封片剂，盖上盖玻片，然后放置晾干。

masson-goldner-trichrome-staining-technique-to-visualize-collagen

Research

科研

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

生物学技术

Staining Techniques

染色技术

Tissue staining

组织染色

Masson Goldner 三色染色:一种可视化心脏切片中胶原蛋白以检测心血管纤维化的技术

4.7K 次观看. 应激激活的心脏成纤维细胞在受伤区域沉积过多的胶原蛋白，这种情况称为纤维化，会损害心脏功能。 为了可视化纤维化的程度，首先，切片石蜡包埋的心脏传导阻滞。将部分放在幻灯片上。加热载玻片以熔化石蜡，使切片粘附。 将载玻片浸入二甲苯中以使组织脱蜡。用递减的酒精浓度处理切片，使切片再水化，并帮助随后结合水性染色成分。 将切片在交?...

Masson Goldner 三色染色：一种用于心血管纤维化检测的心脏组织切片中胶原蛋白可视化技术

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材料

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姓名	公司	目录编号	评论
迈耶苏木精	MHS32-1L	Sigma Aldrich
酸性品红 CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich

ponceau 木素 CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich

橙黄 G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich

亮绿 CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich

二甲苯	10315083	HoneyWell
无水乙醇	10303990	HoneyWell
体视显微镜	SM2800	Nikon
甲醛	99340	Reactolab
包埋盒	K113.1	Carl Roth
Bersoft 图像测量软件		Bersoft.com	授权软件