双重染色法：利用钌红与乳酚棉蓝染色技术可视化植物-真菌互作

摘要

来源：Marques, J. P. R. 和 Nuevo, L. G. 检测植物-真菌互作中果胶的双重染色方法。J. Vis. Exp. (2022)。

本视频展示了一种双重染色方法，使用钌红和乳酸酚棉蓝对咖啡锈病植株中植物与真菌互作过程中的果胶和几丁质进行可视化观察。该实验步骤有助于理解植物在真菌感染过程中的防御机制。

方案

1. 双重染色过程

1. 取感染咖啡锈病的Coffee arabica cv. Catuaí 的超薄树脂包埋叶片切片，加入2 mL含5%棉蓝的乳酸苯酚溶液（由40%甘油、20%苯酚和20%乳酸溶于水制成），置于45 °C加热板上加热5分钟（图1A）。
2. 将载玻片在盛有蒸馏水的烧杯中清洗三次，以去除多余的染料（图1B-D）。
3. 加入2 mL 0.01%的钌红水溶液染色1分钟（图1E）。
4. 将载玻片在盛有蒸馏水的烧杯中清洗三次，以去除多余的染料（图1F,G）。
5. 在切片上滴加一滴蒸馏水，加盖24 mm × 60 mm的盖玻片，用于进行光学显微镜分析。

结果

图1：双重染色实验步骤的详细说明。（A）在切片上滴加棉蓝乳酚溶液，并将载玻片置于45 °C的加热板上加热。（B-C）用蒸馏水洗涤以去除多余染料。（D）洗涤后载玻片上的切片（箭头所示）。（E）在切片上滴加钌红溶液。（F-G）用蒸馏水洗涤以去除多余染料。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
加热板	Dubesser	SSCD25X30-110V	染色
棉蓝乳酚	Metaquímica	70SOLSIG024629	染色
显微镜	Zeiss	#490040-0030-000	图像采集
塑料模具杯托盘	EMS	10176-30	染色
钌红	LABHouse	#006004	染色
显微图像分析软件 Axion Vision	Zeiss	#410130-0909-000	图像采集