偏振光下苦味酸-天狼星红染色：一种利用明场显微镜检测心脏组织切片中纤维化的技术

摘要

来源：Ku, H. C. 等，通过缩窄大鼠腹主动脉建立心脏重构模型。J. Vis. Exp. (2016)。 

本视频介绍了使用偏振光显微镜下观察苦味酸-天狼星红染色法对纤维化组织切片进行染色，以检测纤维化组织中过量的胶原沉积。该染色技术有助于评估结缔组织疾病中的胶原表达情况。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 组织纤维化定量分析

1. 将多聚甲醛固定的心脏组织置于组织切片装置上，切割成 2 mm 厚的切片。将组织切片放入包埋盒中。通过一系列浓度递增的酒精浴（50%、75%、95% 和 100%，每步各 1 小时）对组织进行脱水。
2. 用二甲苯浸润组织 1 小时，最后用石蜡浸润 1 小时。将浸润后的组织放入包埋盒中，并用石蜡包埋。将包埋好的组织蜡块在室温下保存，直至进行切片。
3. 将包埋的组织切成 4 μm 厚的切片。将切片放入 45 ºC 的水浴中。以一定角度将载玻片插入水浴中，逐渐靠近石蜡切片边缘，使切片部分附着于载玻片上。
4. 将载玻片在水浴中反复进出，以去除组织切片下方可能存在的气泡并促进更牢固的附着。在 37 ºC 下干燥载玻片 1 小时，并在室温下保存，用于后续组织学染色。
5. 将载玻片放入染色缸中。用二甲苯脱蜡 30 分钟，然后依次通过稀释的酒精（95%、75% 和 50%，每步各 3 分钟）再水化，最后放入蒸馏水中。加入足量的苦味酸-天狼星红染液，完全覆盖组织切片，染色 1 小时。用 0.5% 醋酸溶液换液冲洗两次，再用无水乙醇冲洗两次。
6. 将载玻片自然晾干，用合成树脂加封片进行封固。在可见光下拍摄载玻片图像。
   注意： 图像中的红色区域显示在 200 倍放大倍数下显微镜观察到的苦味酸-天狼星红阳性区域。计算苦味酸-天狼星红阳性区域占总面积的百分比，以反映纤维化的程度。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
多聚甲醛	Sigma Aldrich	441244
苦味酸-天狼星红溶液	Abcam	ab150681
Imagequant	Molecular Dynamics