苏丹IV染色：一种用于染色收获的小鼠主动脉弓中富含脂质的动脉粥样硬化斑块的方法 关键词：苏丹IV染色，动脉粥样硬化斑块，小鼠主动脉弓，脂质染色，组织学染色

摘要

来源：Centa, M.，等。小鼠动脉粥样硬化定量分析。J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了使用苏丹IV染色法对获取的小鼠主动脉弓中的脂肪沉积进行染色，以观察动脉粥样硬化斑块并确定动脉粥样硬化的程度。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核

1. 主动脉弓和无名动脉的正面分析

1. 准备用于主动脉弓内表面分析的固定垫。将一段石蜡膜折叠八次，制成一个25 mm × 25 mm的平整表面。用黑色电工绝缘胶带包裹其外层，为主动脉提供深色背景。在固定垫背面贴上标签，并使用铅笔写上小鼠编号（普通墨水笔的字迹会在染色过程中消失）。
2. 将主动脉弓转移至固定垫上，并在其上方滴加一滴PBS。在体视显微镜下开始清除残留的外膜周围脂肪组织。
   1. 使用Vannas剪刀和Dumont镊子轻轻剥离所有周围的脂肪组织，避免操作或损伤主动脉。苏丹IV可使脂肪组织明显着色，因此在此步骤中彻底清除所有脂肪组织至关重要。
      注意： 始终保持主动脉湿润，必要时可补充PBS。
3. 沿冠状面切开主动脉，将Vannas剪刀插入主动脉腔内以暴露内膜表面。从升主动脉弓的外侧曲面远端开始切开，并继续切开包括头臂干在内的分支血管，保留降主动脉胸段的背侧部分。
   1. 切开主动脉的小弯侧，并将其展开以充分暴露内膜表面。
      注意： 此步骤需要精细的操作技巧，需经过一定练习方可掌握。
4. 使用微型昆虫....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
黑色电工绝缘胶带（50 mm 宽）	任意专业零售商		用于制作主动脉弓的固定床。
解剖剪刀（10 cm，直型）	World Precision Instruments	14393	用于器官的一般解剖。
Dumont 镊子 #5（11 cm，直型）	World Precision Instruments	500341	用于主动脉的显微解剖。
70% 乙醇（v/v）	VWR Chemicals	83801.29	高度易燃液体和蒸气，应储存于通风良好的地方，并保持阴凉。
无水乙醇 ≥99.8%	VWR Chemicals	20821.31	高度易燃液体和蒸气，应储存于通风良好的地方，并保持阴凉。
4% 稳定化缓冲甲醛（pH 7.0）	VWR Chemicals	9713.1	吸入、皮肤接触或吞咽有害。
异丙醇	Merck	1096341011	易燃液体，可引起严重眼刺激，可能引起嗜睡或头晕。
微型 Castroviejo 针持（9 cm，直型）	World Precision Instruments	503376	用于固定主动脉弓。
Minutien 昆虫针，0.10 mm	Fine Science Tools	26002-10	用于固定主动脉弓。
Parafilm M	Bemis	PM992	石蜡膜，用于制作主动脉弓的固定床。
磷酸盐缓冲液（PBS）	-	-	小鼠灌注需使用无菌且无 RNase 的溶液
体视显微镜	Leica Microsystems	MZ6	用于解剖和表面成像记录
苏丹 IV	Sigma-Aldrich	S4261	未被归类为危险物质或混合物。
Vannas 剪刀（8 cm，直型）	World Precision Instruments	503378	用于主动脉的显微解剖。