Wiesner染色法用于观察木质素：一种对拟南芥（Arabidopsis thaliana）茎中木质素沉积进行染色的技术

摘要

来源：Pradhan Mitra, P. 等人 组织化学染色 拟南芥 次生细胞壁组分 视频实验杂志 (2014).

在本视频中，我们介绍用于染色植物特化细胞中木质素的维斯纳染色法。该染色技术有助于观察拟南芥（Arabidopsis thaliana）茎中木质化的细胞壁，并可帮助定量分析不同类型细胞细胞壁中的木质化程度。

方案

1. 茎部包埋

1. 制备7%的琼脂糖水溶液（7 g电泳级琼脂ose溶于100 ml蒸馏水中）。通过高压灭菌20分钟或在最低功率下微波加热20分钟以溶解琼脂糖。例如，1250瓦微波功率的10%强度。
2. 使用塑料离心管制备用于包埋茎段的自制模具。
   1. 使用剃刀刀片切下2 ml螺口离心管（A部分）的圆锥形底部。用注射器针头在管盖上穿刺一个孔，孔径略大于待包埋茎段的直径。接着，从0.6 ml离心管底部切下0.5 cm（B部分）。
   2. 将0.6 ml微量离心管预先切去的0.5 cm管段插入已预切的2 ml微量离心管中，用Parafilm密封两部分接合处图1).
      注意： 将试管底部切开，以便在琼脂糖凝固后取出包埋的样本。管盖上的孔有助于在将茎段包埋于琼脂糖中时固定茎段位置。模具用于承载琼脂糖并确保包埋时茎段保持垂直。Parafilm 将固定 A 和 B 两部分，直至琼脂糖凝固且茎段完成包埋。
   3. 使用剃须刀片从目标区域切取一段茎组织，（例如 第一个茎节间的中部
      注意： 理想情况下，应在包埋前立即切割茎段，以避免脱水造成的破坏。 Alternatively，可将茎段暂时存放于含有经水润湿的滤纸的培养皿中。该培养皿可置于冰上，直至准备进行包埋，以防止组织脱水和变形。若将茎段在无高湿度条件....

结果

图 1. 用于包埋茎段的自制模具。 左侧：2 ml 螺口微量离心管的上部（A 部分）和 0.6 ml 微量离心管的底部（B 部分）。右侧：Parafilm 膜将 A 和 B 两部分固定在一起，形成最终的模具。

图2. 桂皮酸-HC.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂糖  	EMD	MERC2125	 CAS 编号: 9012-36-6
间苯三酚  	Sigma	P 3502	 1,3,5-三羟基苯 [CAS 编号: 108-73-6]
盐酸  	 EMD	HX0603-75	CAS 编号: 7647-01-0
190 证明乙醇   	KOPTEC	V1401	CAS 编号: 64-17-5
振动切片机  	Leica 	Leica 振动刀片切片机 VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/ products/sectioning/vibratingblade-microtomes/details/product/ leica-vt1000-s/
剃刀  	American Safety Razor 公司	 货号 # 60-0139-0000	不锈钢双刃刀片（Personna Super）
螺帽微量离心管（2 ml）  	VWR	16466-044
微量离心管（0.6 ml）  	Axygen Scientific	 MCT-060-C
组织粘合剂  	Ted Pella 公司	10033	4 °C 或 -20 °C 下保存 3 个月或更长时间
无机械快门的 CCD 芯片相机 	Hamamatsu 	C4742-95
相机软件  	分子设备公司	MetaMorph 版本 7.7.0.0
图像分析  	Adobe	Photoshop CS4
方形显微盖玻片，1 号 	VWR	 48366-067	 22 x 22 mm (7/8 x 7/8") — 盖玻片具有抗腐蚀性
磨砂显微载玻片，1 mm   	VWR	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm