刚果红染色：一种用于可视化植物茎切片中纤维素沉积的技术

摘要

来源：Pradhan Mitra, P., Loqué, D. 组织化学染色 拟南芥 次生细胞壁组分 视觉实验杂志. (2014).

在本视频中，我们演示了刚果红染色法，用于观察拟南芥（Arabidopsis thaliana）茎切片中的纤维素沉积。

方案

1. 刚果红染色

1. 将0.5 g刚果红溶解于100 ml蒸馏水中，配制0.5%的刚果红溶液。
2. 将茎段转移至2.0 ml微量离心管中。向管中加入1 ml 0.5%刚果红溶液。轻轻吹打0.5%刚果红溶液上下混合，避免扰动茎段。
   注意：操作时注意不要将茎段吸入移液器吸头内，以免损伤茎段。
3. 室温孵育10分钟，并重复吹打。随后继续在室温下孵育3分钟。
4. 使用1 ml移液器吸出700 µl 0.5%刚果红溶液。加入700 µl蒸馏水以冲洗残留的刚果红溶液。重复洗涤3–4次，直至洗涤液澄清。
5. 使用剪去尖端的1 ml移液器吸头，使茎段能够无损地被移取。轻柔地将茎段吸入吸头，并转移至显微镜载玻片上，加盖盖玻片。在显微镜下使用激发蓝光、带通560/40滤光片观察载玻片上的样品。
   注意：显微观察前不宜将茎段长时间存放于水中，否则水会在10–30分钟内洗脱刚果红染料。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
刚果红	Sigma	C6277	二钠 3,3'-[[1,1'-联苯]-4,4'-二基双(偶氮)]双(4-氨基萘-1-磺酸) [CAS 编号 573-58-0]
微量离心管 (0.6 ml)	Axygen Scientific	MCT-060-C
带 CCD 芯片且无机械快门的相机	Hamamatsu	C4742-95
高速彩色相机	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
相机软件	Molecular Devices	MetaMorph 版本 7.7.0.0
图像分析	Adobe	Photoshop CS4
方形显微盖玻片，No. 1	VWR	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8") — 盖玻片耐腐蚀，厚度均匀且平整。No. 1 厚度为 0.13 至 0.17 mm。
磨砂显微载玻片，1 mm	VWR	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2 滤光立方体	Leica	11513851/11513885	用于刚果红分析的滤光片，带通为 560/40。