Calcofluor White 染色：一种通过紫外诱导荧光可视化双子叶植物茎切片细胞壁中纤维素沉积的简易方法

摘要

来源：Pradhan M. 等. 组织化学染色 拟南芥 次生细胞壁组分 视频实验杂志 (2014)

在本视频中，我们介绍了一种染色方法，利用能够特异性结合β-连接葡聚糖并在紫外光下产生荧光的棉酚白（calcofluor white），对双子叶植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）细胞壁中的纤维素沉积进行可视化观察。

方案

1. 茎段包埋

1. 制备7%的琼脂糖水溶液（7 g电泳级琼脂ose溶于100 ml蒸馏水中）。通过高压灭菌20分钟或在最低功率下微波加热20分钟以溶解琼脂糖。例如，1250瓦微波的10%强度）。
2. 使用塑料离心管自制模具，用于包埋茎段。
   1. 使用剃须刀片切下2 ml螺口离心管（A部分）的圆锥形底部。用注射器针头在管盖上穿一个孔，孔径略大于待包埋茎段的直径。接着，从0.6 ml离心管底部切下0.5 cm（B部分）。
   2. 将0.6 ml微量离心管底部已切去的0.5 cm部分插入预先切好的2 ml微量离心管中，用Parafilm密封两部分接合处。图1).
      注意将试管底部剪掉，以便在琼脂糖凝固后取出包埋的样品。管盖上的孔有助于在将茎段包埋于琼脂糖时固定茎段位置。模具用于承载琼脂糖，并在包埋过程中保持茎段直立。Parafilm 将固定 A 和 B 两部分，直至琼脂糖凝固且茎段完全包埋。
   3. 使用剃须刀片从目标区域切取一段茎段，（例如 第一个茎节间的中部
      注意理想情况下，应在包埋前立即切割茎段，以避免脱水造成的破坏。 Alternatively，可将茎段暂时存放于含有经水润湿的滤纸的培养皿中。该培养皿可置于冰上，直至准备进行包埋，以防止组织脱水和变形....

结果

图1. 用于包埋茎段的自制模具。 左侧为2 ml螺口微型离心管的上部（A部分）和0.6 ml微型离心管的底部（B部分）。右侧为Parafilm膜将A和B两部分固定在一起，形成最终的模具。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂糖	EMD	MERC2125	CAS 编号: 9012-36-6
荧光增白剂 28 / 卡尔科弗卢尔白染色剂	Sigma	F3543	4,4'-双[[4-[双(2-羟乙基)氨基]-6-苯胺基-1,3,5-三嗪-2-基]氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸 [CAS 编号 4404-43-7]
振动切片机	Leica	Leica 振动刀片切片机 VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/
剃刀	美国安全剃刀公司	货号 # 60-0139-0000	不锈钢双刃刀片（Personna Super）
螺帽微量离心管（2 ml）	VWR	16466-044
微量离心管（0.6 ml）	Axygen Scientific	MCT-060-C
隔热手套	Bel-Art	380000000	SCIENCEWARE 高温防护手套
组织粘合剂	Ted Pella 公司	10033	在 4 °C 或 20 °C 下保存 3 个月或更长时间
微波炉	Panasonic	NN-SD762S	PELCO Pro CA 44 快速组织粘合剂
方形显微盖玻片，No. 1	VWR	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8") — 盖玻片耐腐蚀，厚度均匀且平整。No. 1 厚度为 0.13 至 0.17 mm。
磨砂显微载玻片，1 mm	VWR	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
Parafilm M	Alcan 包装公司	BRNDPM998