来源：Guallar-Garrido, S.，等。通过薄层色谱法分析分枝杆菌的脂质组成。J. Vis. Exp. (2021)。
本视频演示了基于薄层色谱法分离分枝菌酸的技术。该技术根据分枝菌酸——存在于分枝杆菌细胞壁中的长链脂质——的极性差异实现不同类型分枝菌酸的分离。
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方法文章
基于薄层色谱法分离分枝杆菌酸变体：一种根据极性分离分枝杆菌细胞壁脂质的方法
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 从分枝杆菌中提取总非共价结合脂质（图1）
- 从固体培养基上刮取 0.2 g 分枝杆菌，加入带有聚四氟乙烯（PTFE）衬垫螺旋盖的玻璃管中。加入由 5 mL 氯仿和 10 mL 甲醇组成的溶液（氯仿:甲醇，1:2）。
注意：使用有机溶剂时，只能使用玻璃容器，禁止使用塑料容器。此外，瓶子必须使用带 PTFE 衬垫的螺旋盖。
警告：氯仿是一种潜在有毒且高度危险的物质，必须在层流罩内操作，并穿戴适当的个人防护装备（实验服、护目镜和腈类手套）。
警告：甲醇是一种潜在有毒且高度危险的物质，必须在层流罩内操作，并穿戴适当的个人防护装备（实验服、护目镜和腈类手套）。 - 将试管持续搅拌过夜，以提取分枝杆菌细胞表面非共价结合的脂质。
注意：若无轨道摇床，可用尽可能频繁的手动搅拌代替持续搅拌。 - 用滤纸覆盖玻璃漏斗，过滤有机溶剂，并收集至玻璃试管中。
- 使用氮气流吹干试管中的液相。用氮气充满试管，盖好后于 4 °C 保存。
注意：可将玻璃巴斯德吸管连接至氮气流，专门用于吹干目标试管。此外，....
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结果
图1：从固体培养基上培养的分枝杆菌中提取脂质成分的流程示意图。 解析分枝杆菌细胞中所含脂质的主要步骤。
图 2：从固体培养基上培养的分枝杆菌中提取分枝菌酸含量的操作流程示意图。 利用（A）酸性甲醇解或（B）皂化方法解析分枝杆菌细胞中所含分枝.......
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 乙酸 | 默克 | 100063 | 警告：无水分析纯 EMSURE® ACS，ISO，Reag. Ph Eur |
| 丙酮 | Carlo Erba | 400971N | 警告：分析用丙酮 RPE-ACS-ISO，1000 毫升 |
| 蒽酮 | 默克 | 8014610010 | 用于合成的蒽酮 |
| 苯 | Carlo Erba | 426113 | 警告：苯 RPE - 用于分析 - ACS 2.5 L |
| 毛细玻璃管 | 默克 | BR708709 | 品牌® 一次性 BLAUBRAND® 微量移液器，intraMark |
| 氯仿 | Carlo Erba | 412653 | 警告。氯仿 RS - 用于高效液相色谱 - 等度级 - 以乙醇稳定 2.5 L |
| 干浴加热器 | J.P. Selecta | 7471200 | |
| 二氯甲烷 | Carlo Erba | 412622 | 警告：二氯甲烷 RS - 用于高效液相色谱 - 等度级 - 以2.5%亚甲基戊烯稳定化 2.5 L |
| 乙醚 | Carlo Erba | 412672 | 警告：二乙醚对照品 - 用于高效液相色谱 - 等度洗脱级 - 未稳定化 2.5 L |
| 乙酸乙酯 | Panreac | 1313181211 | 警告：乙酸乙酯（分析纯，ACS，ISO，Reag. USP，Ph. Eur.） |
| 无水乙醇 | Carlo Erba | 4146072 | 警告：无水乙醇 RPE - 分析用 - ACS - 欧洲药典试剂 - 美国药典试剂 1 L |
| 玻璃漏斗 | VidraFOC | DURA.2133148 1217/1 | |
| 玻璃管 | VidraFOC | VFOC.45066A-16125 | 带聚四氟乙烯内衬盖的玻璃管 |
| 甲醇 | Carlo Erba | 412722 | 警告：甲醇 RS - 用于HPLC - GOLD - 超梯度级，2.5 L |
| 钼磷酸水合物 | 默克 | 51429-74-4 | 警告 |
| 1.3% 钼蓝喷雾试剂 | Sigma | M1942-100ML | 警告 |
| 正己烷 | Carlo Erba | 446903 | 警告：正己烷 99% RS - ATRASOL - 痕量分析用 2.5 L |
| N-亚硝基-N-甲基脲 | Sigma | N4766 | 警告 |
| 轨道摇床平台 | DDBiolab | 995018 | NB-205L 台式振荡培养箱 |
| 石油醚（60-80）ºC) | Carlo Erba | 427003 | 警告：石油醚 60 - 80°C RPE - 用于分析 2.5 L |
| 喷雾器 | VidraFOC | 712/1 | |
| 无水硫酸钠 | 默克 | 238597 | |
| 硫酸 95-97% | 默克 | 1007311000 | 警告：硫酸 95-97% |
| 薄层色谱展开槽 | 默克 | Z204226-1EA | 矩形薄层色谱展开槽，完整套装 L × H × W 22 cm × 22 cm × 10 cm |
| 薄层色谱板 | 默克 | 1057210001 | TLC 硅胶 60-20×20 cm × 25 μm |
| 薄层色谱板加热器 | CAMAG | 223306 | CAMAG 薄层色谱加热板 III |
| 甲苯 | Carlo Erba | 488551 | 警告。甲苯 RPE - 用于分析 - ISO - ACS - 欧洲药典试剂 - 美国药典试剂 1 L |
| 涡旋混合 | Fisher Scientific | 10132562 | IKA IKA 摇床órtex 3 |
| 1-萘酚 | Sigma-Aldrich | 102269427 | 警告 |
