来源：Fhied, C. L. 等，利用多指标免疫微球检测法动态监测新冠血清转化。J. Vis. Exp. (2022)。
本视频介绍了一种使用荧光磁性微珠或微球的免疫分析技术，该微珠或微球偶联了不同抗原，可同时检测血清样本中的多种抗体亚型。该检测方法有助于了解感染期间或接种疫苗后的血清学转化过程。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
方法文章
多分析物免疫珠检测：一种基于流式技术的免疫分析方法，用于同时检测人血清样本中的多种抗体亚型
1.1K 次观看
⸱
2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及人类受试者的研究程序均遵循机构、国家及国际人类福利指南，并已通过当地机构审查委员会的审核。
1. 抗原偶联微球的制备
- 选择三种不同小瓶的磁性微球，每种具有独特的微球区域，记录每个使用小瓶的微球编号（bead ID）和批号信息。
注意： 以下步骤将针对每种不同的微球区域分别进行。微球对光敏感，应避免长时间暴露于光照下。在洗涤步骤中，注意不要扰动微球。若发生扰动，需额外静置60秒以完成分离。 - 使用前将微球储备液涡旋振荡60秒，并超声处理5分钟，以解离聚集的微球。
- 将1.0 × 106个微球转移至1.5 mL低蛋白结合力的微量离心管中。
- 将离心管插入磁力分离器中，静置60秒使微球分离。保持离心管仍在磁力分离器中，小心吸除上清液，避免扰动微球沉淀。
- 从磁力分离器中取出离心管，加入100 µL高效液相色谱级水重悬微球，涡旋振荡30秒。再将离心管放回磁力分离器中静置60秒，随后吸除上清液。重复此洗涤步骤两次。
- 从磁力分离器中取出离心管，加入90 µL 100 mM 磷酸二氢钠缓冲液（pH 6.2，活化缓冲液），涡旋振荡30秒，重悬已洗涤的微球。
- 向微球中加入10 µL 50 mg/mL Sulfo-NHS（用活化缓冲液稀释），轻轻涡旋10秒；再加入10 µL 50 mg....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 384孔黑色侧边聚苯乙烯微孔板 | Thermo Fisher | 12-565-346 | |
| 活化缓冲液（0.1 M NaH2PO4，pH 6.2） | 自行配制 | ||
| 检测缓冲液（PBS，1% 牛血清白蛋白，0.01% 吐温-20） | 自行配制 | ||
| 牛血清白蛋白，热休克组分 | MilliporeSigma | A-7888-50G | |
| 偶联缓冲液（50 mM MES，pH 5.0） | 自行配制 | ||
| 新型冠状病毒（COVID-19 M Coronavirus）重组基质蛋白（6xHis标签） | MyBioSource | MBS8574735 | |
| 一次性移液器吸头 | |||
| EDC（1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐） | Thermo Fisher | PIA35391 | |
| 山羊白蛋白，V组分粉末 | Millipore Sigma | A2514-1G | |
| 山羊抗人IgA，R-PE标记，多克隆抗体 | Thermo Fisher | OB205009 | |
| 山羊抗人IgG，R-PE标记，多克隆抗体 | Thermo Fisher | OB204009 | |
| 山羊抗兔IgG，R-PE标记，多克隆抗体 | Thermo Fisher | OB403009 | |
| 山羊抗人IgM，R-PE标记，多克隆抗体 | Thermo Fisher | OB202009 | |
| 小鼠抗人IgM，SB 436标记，克隆号 SA-DA4 | Thermo Fisher | 62999842 | |
| 仪器分析仪 | Luminex Corp. | INTELLIFLEX-RUO | |
| 低吸附微量离心管（1.5 mL） | Thermo Fisher | 13-698-794 | |
| MagPlex-C 微球，区域 XXX | Luminex Corp. | MC10XXX-01 | |
| MES 水合物（2-(N-吗啉)乙烷磺酸水合物） | MilliporeSigma | M2933 | |
| 微孔板铝封膜 | Thermo Fisher | 07-200-683 | |
| 吐温-20 | Thermo Fisher | BP337-500 | |
| Quality Biological Inc. PBS，pH 7.2 | Thermo Fisher | 50-751-7328 | |
| 封闭缓冲液（PBS，1% 山羊血清白蛋白，0.01% 吐温-20） | 自行配制 | ||
| SARS-CoV-2（2019-nCoV）核衣壳蛋白（His标签） | Sino Biologicals | 40588-V08B | |
| SARS-CoV-2（2019-nCoV）刺突蛋白（S1亚基，His标签） | Sino Biologicals | 40591-V08H | |
| SARS-CoV-2（2019-nCoV）刺突蛋白RBD抗体，兔多克隆抗体 | Sino Biologicals | 40592-T62 | |
| SARS-CoV-2（2019-nCoV）核衣壳抗体，兔单克隆抗体 | Sino Biologicals | 40588-R0004 | |
| SARS-CoV-2（COVID-19）膜蛋白抗体（IN），兔多克隆抗体 | ProSci | 10-516 | |
| Sulfo-NHS（N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠） | Thermo Fisher | PIA39269 | |
| 洗涤缓冲液（PBS，0.01% 吐温-20） | 自行配制 | ||
| 水，LC/MS级 | Thermo Fisher | W-64 |
