小分子杀线虫剂筛选试验:一种针对 Ditylenchus dipsaci 筛选潜在杀线虫剂的中等通量方法

Abstract

来源:Cammalleri， S. R.， et al. 培养和筛选植物寄生线虫 Ditylenchus dipsaci. J. Vis. Exp. （2022 年）。

在本视频中，我们演示了一种筛选试验，以确定小分子杀线虫剂对线虫的疗效。如果杀线虫剂在暴露后导致样品中移动线虫的数量减少，则认为杀线虫剂有效。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查

1. 体外小分子筛选

1. 按照以下步骤准备检测板。
   1. 将高压灭菌的蒸馏水倒入无菌槽中，并使用多通道移液器将 40 μL 蒸馏水从槽分配到平底 96 孔板的每个孔中。
2. 准备固定工具并添加化学品。
   1. 在实验室工作台上的本生灯火焰附近设置装瓶托盘（参见材料表）。将以下内容添加到连续的装瓶托盘中:25 mL 针清洁溶液、35 mL 50% DMSO（水溶液）、45 mL 蒸馏水、55 mL 70% 乙醇和 65 mL 95% 乙醇。在每个托盘前面放一张吸墨纸。
   2. 通过在清洁溶液中喷出销钉并在溶液中上下移动销钉 3 次 （3x） 来清洁钉固定工具。在此协议中，"3x"和"10x"定义为在解决方案中分别上下移动 penter 3 次或 10 次。吸干吸墨纸上的针脚。再次重复此过程。
      1. 接下来，用蒸馏水冲洗针脚 3 次，然后吸干针脚。再次重复该过程。
      2. 最后，用 95% 乙醇冲洗针脚 3 次，然后吸干针脚。再重复一次。将 pinner 点燃，让乙醇蒸发。
   3. 将 96 孔化学储备板中的化学品加入检....

Materials