内毒素活性检测：一种基于化学发光的生物检定法用于检测血液样本中的内毒素活性

摘要

来源：Pinciroli, R. 等. 危重患者全血内毒素血症检测的内毒素活性测定法. J. Vis. Exp. (2019).

本视频展示了一种用于检测全血样本中内毒素活性的快速生物测定方法 通过 一种基于化学发光的方法。该检测是一种快速且灵敏的生物标志物检测方法，用于内毒素介导的脓毒症的早期诊断。

方案

所有涉及人类参与者的操作均遵循机构、国家和国际关于人类福祉的指南，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 内毒素活性检测（EAA）

1. 使用含EDTA抗凝剂的无菌试管采集患者血液样本。将血液样本置于室温保存
2. 为需要检测的每位患者的血液样本准备EA检测管。将试管放入试管架中，然后取下管盖。
3. 每项EA检测包含5种不同类型的试管；每种试管用于检测的不同步骤（参见后续步骤）。
   1. 使用试管#1（“对照”管）测定患者中性粒细胞在无特异性抗体存在时的非特异性氧化爆发基础活性。
   2. 使用试管#2（“样本”管）测定中性粒细胞对脂多糖 (LPS)-抗体复合物的氧化爆发反应。
   3. 使用试管#3（“最大值”管）测定患者中性粒细胞在过量内毒素刺激下的最大氧化爆发活性。
   4. 使用试管#4（“LPS”管）作为外源性内毒素来源。
   5. 使用试管#5（“分装”管）用于血液储存。
      注意： 提供试管#1、#2和#3的重复管，每份待测血液样本共需使用8支试管（EA试剂瓶和质控测试可用于同一包装内的所有检测）。
4. 使用多通道移液器，从试剂瓶中吸取1 mL EA试剂，分别加入试管#1（对照管）、#2（样本管）和#3（最大....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
必需氨基酸检测试剂盒	Spectral Medical Inc.	EAAST-20	包含20次检测及1次质控的套装
Smart Line TL	Berthold	EAASL	发光检测仪
恒温振荡培养箱	GRANT	ES-20	小型恒温振荡培养箱
涡旋混合器	VWR	444-2790	涡旋仪