溶血试验：一种体外测定钙离子载体诱导人红细胞裂解的方法

摘要

来源：Bigdelou, P. 等，使用钙离子载体诱导红细胞凋亡。视觉化实验杂志 (2020)。

本视频介绍了一种体外实验方法，用于测定人样本中由钙离子载体诱导的红细胞溶血或裂解。该实验通过定量破裂的红细胞所释放的血红蛋白，来测量溶血百分比。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 从全血中分离红细胞

1. 取500 µL以酸性柠檬酸葡萄糖（ACD）抗凝的全血（储存于4 °C）加入微量离心管中。
   注意： 全血购自ACD抗凝血。根据供应商说明，每7 mL全血中加入1.5 mL ACD（总体积为8.5 mL）。
2. 将全血在室温（RT）下以700 × g 离心5分钟，用移液器小心移除上层透明血浆及薄层白细胞层，保留下层红细胞层。
3. 配制1 L林格溶液，其中含125 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM MgSO₄、32 mM HEPES、5 mM葡萄糖和1 mM CaCl₂。通过逐滴加入2 µL的1.0 M NaOH溶液，将pH值调节至7.4。如需配制无葡萄糖林格溶液，按相同步骤操作，但不添加葡萄糖。
4. 用林格溶液将红细胞洗涤2次：将细胞沉淀重悬于1.5 mL林格溶液中，在室温下以700 × g 离心5分钟，弃去上清液。
5. 将40 µL红细胞沉淀重悬于9,960 µL无葡萄糖林格溶液中，最终体积为10 mL，制备成0.4%的红细胞压积。
   注意： 红细胞压积（hematocrit）是指悬浮....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
96孔板	Fisher Scientific	12-565-331
CaCl2	Fisher Scientific	C79-500
离心	Millipore Sigma	M7157	Eppendorf 5415C 型号
DMSO	Sigma-Aldrich	472301-100ML
葡萄糖一水合物	Sigma-Aldrich	Y0001745
HEPES缓冲液（1 M）	Fisher Scientific	50-751-7290	4°C 下保存 °C
钙离子霉素钙盐	EMD Milipore Corp.	407952-1MG	溶于DMSO中，浓度为2 mM。-20℃保存。 °C
KCl	Fisher Scientific	P330-500
MgSO4	Fisher Scientific	M65-500
微量离心管	Fisher Scientific	02-681-5
NaCl	Fisher Scientific	S271-500
Synergy HFM 微孔板读板机	BioTek
ACD抗凝全血	Zen-Bio		4°C 下保存 °C 并升温至 37 °使用前置于 C