小鼠器官离体葡萄糖摄取评估的替代测量技术：细胞外荧光葡萄糖类似物消耗量测定

摘要

来源：Kumar, S. B. 等., 细胞和组织中葡萄糖摄取的间接测量方法：细胞外葡萄糖耗竭 离体. 视频实验杂志 (2022)

在本视频中，我们演示一种离体（ex vivo）技术，用于测量从小鼠器官中分离出的组织对外源性葡萄糖类似物的消耗。该方法包括将小鼠组织置于含有荧光标记的脱氧葡萄糖溶液中孵育，该类似物可被细胞摄取。通过测定孵育后培养基中的荧光强度，可间接评估葡萄糖类似物的摄取情况。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医评审委员会的审核。

注意：所有操作必须在II级生物安全柜中进行，且风机应保持开启，灯光关闭。

1. 材料准备

注意：所有材料均列于材料列表中。

1. 在 II 级生物安全柜中，根据表 1配制培养基 1、离心用培养基 2，以及荧光标记的 2-脱氧-2-[(7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-基)氨基]-D-葡萄糖（2-NBDG 或 FD-葡萄糖）的储存液和工作液。实验过程中需避光处理 FD-葡萄糖，可通过关闭生物安全柜内所有光源实现。
2. 使用即用型细胞培养试剂：胰蛋白酶-EDTA、磷酸盐缓冲液（PBS）以及无葡萄糖且无酚红的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（下文简称无葡萄糖 DMEM）。

2. 离体 器官中细胞外FD-葡萄糖消耗量的测定

1. 在器官解剖前，对小鼠进行促进葡萄糖代谢的化合物预处理，步骤如下。
2. 使用九周龄的雄性 Lep^ob 小鼠（n = 1....

结果

图1：不同器官中细胞外FD-葡萄糖消耗的动力学 离体. (A-C) Lep^ob 小鼠分别注射了载体（PBS，n = 4）、胰岛素（12 IU/kg 体重，n = 3）和 AAC2（1 nmol/g 体重，n = 3）。给药 15 分钟后，解剖并分离组织。取（A内脏脂肪，（B）肝脏，以及（C) 脑组织在FD-葡萄糖（0.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
96孔板	Falcon	353227	塑料器皿
B6.V-Lepob/J 雄性小鼠	Jackson Laboratory	货号 000632	 小鼠
BioTek Synergy H1 模块化多功能微孔板读板仪（Fisher Scientific, US）	Fisher Scientific, US	Fisher Scientific, US	设备
细胞培养箱	Forma	Series II Water Jacket	设备
饲料（小鼠/大鼠饲料，辐照处理）	Envigo	Teklad LM-485	饲料
异氟烷，5%	Henry Schein	NDC 11695-6776-2	麻醉剂
磷酸盐缓冲液	Sigma-Aldrich	DA537-500 mL	细胞培养
青霉素/链霉素（P/S）	Gibco/ThermoFisher	15140-122	细胞培养
无葡萄糖且无酚红的DMEM培养基	Gibco/ThermoFisher	A14430-01	细胞培养
荧光标记的2-脱氧-2-[(7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-基)氨基]-D-葡萄糖（2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3- benzoxadiazol-4-yl) amino]-D-glucose）	Sigma	72987-1MG	检测
杜尔贝科改良伊格尔培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）	Gibco/ThermoFisher	11965-092	细胞培养
牛血清	Gibco/ThermoFisher	161790-060	细胞培养
乙醇	Sigma-Aldrich	E7023-500mL	试剂