生物报告基因检测：一种利用生物发光报告系统检测SARS-CoV-2抗体的灵敏技术

摘要

来源：Rezaei, R. 等，利用 HiBiT 基础生物报告系统检测 SARS-CoV-2 受体结合域抗体。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们展示了基于 HiBit-RBD 生物报告系统检测 SARS-CoV-2 中和抗体的方法。该系统利用包含与 RBD 结构域融合的 HiBiT 的生物发光报告系统，靶向病毒的 RBD 结构域。

方案

1. 使用快速且灵敏的检测方法检测抗RBD抗体

1. HiBiT-RBD 抗体检测实验
   1. 制备 HiBiT-RBD 生物报告分子。
      注意：建议在后续实验中使用上清液，因其更易于收集，且含有成熟糖基化的蛋白形式。此外，裂解液中含有多种其他蛋白，可能干扰 HiBiT-RBD 与抗体的相互作用。
   2. 在 1.5 mL 微量离心管中，将 50 µL 含 HiBiT-RBD 的上清液与 1 µg 商品化 SARS-CoV-2-RBD 抗体混合。向溶液中加入 20 µL 免疫球蛋白结合蛋白（Protein G）。用 PBS 补充至总体积为 300 µL。
      注意：混合物的总体积可减少至 150 µL。不建议使用更低的总体积，因其可能导致抗体与生物报告分子混合不充分。
   3. 将离心管置于管式振荡器或旋转混合仪上孵育 30 分钟。在 12,000 x g 条件下离心 30 秒，弃去上清液，并用 PBS 洗涤。重复该步骤三次，以去除未结合的 HiBiT-RBD。最后用 50 µL PBS 重悬沉淀，转移至 96 孔板中。
   4. 加入 50 µL 1x LgBiT，静置 5 分钟。随后加入 50 µL 1x NanoLuc 底物，立即使用发光仪读取发光信号。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Bio-Plex 手持式磁力洗涤仪	Bio-Rad	171020100	设备
Dual-Glo 荧光素酶检测系统	Promega	E2940	100 mL 试剂盒
LgBiT	Promega	N3030	检测试剂盒
Pierce Protein G 磁性珠	Thermo Fisher Scientific	88848	检测
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) 刺突蛋白中和抗体，小鼠单克隆抗体	SinoBiological	40592-MM57	检测
Synergy Mx 微孔板读板仪	BioTek		96 孔板读板仪，发光检测仪