病毒蚀斑实验：通过定量病毒感染细胞单层中形成的蚀斑来测定单纯疱疹病毒的感染性

本文内容

摘要

来源：Sadowski, L. A. 等. 单纯疱疹病毒的蚀斑实验. 视频实验杂志 (2021)

本视频介绍了感染性单纯疱疹病毒（HSV）的病毒蚀斑测定方法。将稀释后的病毒颗粒接种至上皮细胞单层，经孵育后，病毒形成肉眼可见的蚀斑，通过直接计数蚀斑数量以确定感染性病毒滴度。

方案

1. Vero 细胞的接种

在开始进行蚀斑试验的前一天，用胰蛋白酶消化Vero细胞，并将其重悬于常规的杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中，按照标准细胞培养方法添加补充物。将消化后的细胞以每T-75培养瓶融合的Vero细胞（约10⁷个细胞）加入10 mL DMEM进行重悬。
注意：蚀斑试验使用DMEM而非α-MEM，因为DMEM可略微减缓细胞生长速度，有利于获得更佳的蚀斑试验结果。
采用研究者偏好的方法对细胞进行计数（例如，使用台盼蓝排斥法的标准血细胞计数板）。
以每孔4 × 10⁶个细胞的密度接种细胞；对于HSV-2，使用6孔板，每孔加入2.5 mL DMEM（含补充物）；对于HSV-1，使用12孔板，每孔加入1.25 mL DMEM（含补充物）。
注意：无论使用何种培养板，接种的细胞数量应保持恒定，但孔的尺寸会影响蚀斑试验的准确性。确保细胞均匀分布至关重要，最有效的方法是前后摇动培养板，而非以旋转方式晃动。
将细胞置于加湿的培养箱中，在37 °C、5% CO₂条件下培养过夜。
注意：培养箱内的湿度通过在底部放置含有除藻剂的蒸馏水盘来维持。

2. 样品稀释

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材料

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