植物组织中可溶性蛋白含量的可溶性蛋白测定

摘要

来源：Deans, C. A. 等。利用玉米（Zea mays）作为示例定量测定植物可溶性蛋白质和可消化碳水化合物含量。J. Vis. Exp. (2018)

本视频介绍了一种比色法，用于定量植物组织中的可溶性蛋白质含量。该方法利用考马斯亮蓝 G-250 染料，该染料与可溶性蛋白质相互作用，形成蓝色稳定的蛋白质-染料复合物，其颜色深浅与组织中可溶性蛋白质含量成正比。

方案

1. 植物采集与处理

1. 采集并处理植物样品
   1. 采集植物样品后，使用镊子将植物材料浸入液氮中进行速冻，并于 -80 °C 保存。若采集的植物样品过大而无法进行速冻，可先用干冰快速冷却，并尽快转移至 -80 °C 冰箱中。植物组织脱离植株后，其大量营养元素含量可能发生改变，因此采集后应尽快冷冻样品。
      注意：液氮接触皮肤可导致严重冻伤。请务必使用经批准的容器运输液氮，并在操作时穿戴适当的个人防护装备，包括低温手套、护目镜、面罩、围裙和实验服。
   2. 使用冷冻干燥机对植物材料进行冻干，以确保在去除水分的过程中组织处于代谢失活状态。持续干燥直至样品质量稳定，以确保完全去除水分。
   3. 样品干燥后，使用研磨机或研磨仪研磨成细粉。将样品储存于干燥柜中，直至进行分析。

2. 可溶性蛋白质测定

1. 样品制备
   1. 称取每种组织的重复样品各约 20 mg，分别放入 1.5 mL 聚苯乙烯微量离心管中，并标记管子。这些样品后续将被称为未知样品。记录每个样品的精确质量，因为该信息将用于计算每个未知样品中的可溶性蛋白百分比。请使用带锁紧盖的微量离心管，因为非锁紧盖可能在后续加热步骤中打开，导致样品溶液丢失。
2. 溶解并分离未知样品中的蛋白质
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
酶标仪（分光光度计）	Bio-Rad	Model 680 XR
Bio-Rad 蛋白检测试剂浓缩液	Bio-Rad	#5000006	450 mL