基于脑电图的癫痫样活动记录技术

摘要

来源：Carvalho, M. 等，内嗅皮层-海马体脑片培养中癫痫发生的模型。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频介绍了使用电生理学或脑电图（EEG）装置在体外记录鼻周皮层-海马器官型脑片癫痫样放电活动的技术。该技术有助于研究癫痫发生的动态过程及进展，并可用于筛选治疗癫痫的潜在治疗靶点。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 鼻周皮层-海马切片的制备

注意：内嗅皮层-海马切片的制备使用 P6-7 天的 Sprague-Dawley 大鼠。

1. 培养设置与培养基制备
   1. 在接种培养前一天，准备好所需培养基，并将其置于 4 °C 保存。
   2. 制备解剖用培养基：在 Gey's 平衡盐溶液（GBSS）中加入 25 mM 葡萄糖。
   3. 制备培养用培养基：50% Opti-MEM、25% HBSS、25% 马血清（HS）、25 mM 葡萄糖、30 µg/mL 庆大霉素。
   4. 制备维持培养基：Neurobasal-A（NBA）、2% B27、1 mM L-谷氨酰胺、30 µg/mL 庆大霉素，以及不同浓度的马血清（15%、10%、5% 和 0%）。
2. 脑组织获取
   1. 在开始培养前，用 P1000 移液器向 6 孔板的每个孔中加入 1.1 mL 培养基，并将其置于 37 °C 环境中。
   2. 将所有设备（解剖显微镜、组织切片机、解剖灯、解剖工具、电极、培养板、插入物和滤纸）放入生物安全柜内，并在紫外线下灭菌 15 分钟。
   3. 将切片厚度....

结果

图 1：鼻皮质-海马体脑片制备的详细步骤。（A）从头部取出脑组织，将其置于冰冻的GBSS中，背侧朝上。（B）将镊子插入小脑部位，沿中线切开脑组织，并去除海马体上方的多余组织。（C）用刮匙在海马体下方进行切割，如箭头所示。（D）将两个海马体朝上并平行放置于滤纸上，在组织切片机上切成350 µm厚的切片。（E）将切好的海马体组织置于冰冻的GBSS中。（F）借助圆头玻璃电极分离各切片。（G）仅选取显示完整鼻皮质与海马体结构的切.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
人工脑脊液 (aCSF)			自制
B-27™ 补充剂 (50X)，无血清	Thermo Fisher Scientific	17504-044
手术刀片（用于刀柄）	Fine Science Tools	10011-00
牛血清白蛋白 (BSA)	NZYTech	MB04602	使用 5% BSA 稀释一抗。将 0.5 g BSA 加入 10 mL PBS 中。
脑组织切片孵育系统	Warner Instruments
细胞培养插件，30 mm，亲水性聚四氟乙烯 (PTFE) 	Millipore SAS	PICM03050
常规培养箱 	Thermo Scientific Heraeus	BB15, Function Line	设定为 37 °C 和 5% CO2
盖氏平衡盐溶液 (GBSS)’ 	Biological Industries	01-919-1A
玻璃电极 	Science Products	GB150F-10	圆头，自制
界面式孵育室 	Warner Instruments	BSC-HT Haas Top
弯头虹膜刮匙	Fine Science Tools	 10092-12
镜头清洁纸	TIFFEN
L-谷氨酰胺溶液 200 mM (Q)	Thermo Fisher Scientific	25030-024
组织切片机	The Mickle Laboratory Engineering CO. LTD.	MTC/2	设定为 350 μm