PolyQ 聚集检测试剂盒鉴定化合物在蠕虫中的神经保护作用

摘要

来源:Wang， Q. et al.秀丽隐杆线虫作为发现针对聚谷氨酰胺介导的神经毒性的生物活性化合物的模型系统。J. Vis. Exp.（2021 年）

该视频描述了一种体内方法，用于筛选神经保护测试化合物在减少线虫体壁肌肉细胞中 polyQ 聚集和改善聚集相关蛋白毒性方面的保护潜力。

方案

1. PolyQ 聚集检测

1. 用于 polyQ 聚集测定的线虫的制备
   1. 将 300-500 只同步的 L1 幼虫 AM141 转移到含有 500 μL 含有 OP50（OD₅₇₀ 为 0.7-0.8）和 5 mg/mL 黄芪的 S 培养基的 48 孔板的每个孔中，通常每个处理一个孔，一个时间点。
   2. 用封口膜密封板，并在 20 °C 和 120 rpm 下孵育 24、48、72 和 96 小时。
   3. 在无菌的 1.5 mL 微量离心管中收获线虫，并用 M9 缓冲液洗涤 >3 次，离心（1000 × g，1 分钟）以去除剩余的 OP50。在 M9 缓冲液中重悬 AM141 线虫，并准备好进行图像采集。
2. 荧光图像采集和数据分析
   注:使用该高内涵成像系统自动分析数据。如果没有自动成像设备，可以使用常规方法来制备琼脂糖垫以进行图像采集，方法是使用普通荧光显微镜来实现类似的性能。
   1. 将 10-15 个线虫转移到 384 孔板中的每个孔中（每孔最终体积 80 μL）。为每个处理设置 10 个重复孔。
   2. 向每个孔中加入 10 μL 200 mM 叠氮化钠以麻痹线虫并让它们沉降到底部（5-10 分钟）。
   3. 将板置于高内涵成像系统中以获取荧光图像（有关设备和软件信息，请参见<....

材料