一种用于研究受试化合物对线虫中多聚谷氨酰胺介导的神经毒性的抑制作用的检测方法

摘要

来源：Wang, Q. 等人 秀丽隐杆线虫 作为发现抗多聚谷氨酰胺介导神经毒性的生物活性化合物的模型系统。 视频实验杂志 (2021)

在本视频中，我们介绍了一种评估受试化合物黄芪多糖对神经元存活神经保护作用的方法 秀丽隐杆线虫 来自多聚谷氨酰胺介导的神经毒性。该检测方法利用 秀丽隐杆线虫 在其 ASH 神经元中表达与 GFP 融合的异常扩增的多聚谷氨酰胺（polyQ）重复序列，以检测测试化合物处理后的神经元存活情况。

方案

1. 多聚谷氨酰胺介导的神经毒性检测

1. 测试样品对 C. elegans 的处理
   1. 为准备用于多聚谷氨酰胺（polyQ）神经毒性检测的线虫，将 300–500 条同步化的 HA759 L1 幼虫转移至 48 孔板的每个孔中，每孔加入含 OP50（OD₅₇₀ 为 0.7–0.8）和 5 mg/mL 黄芪多糖的 500 µL S 培养基；通常每种处理设置三个重复孔。
   2. 用封口膜密封培养板，在 15 °C、120 rpm 条件下振荡培养 3 天。
   3. 通过离心收集线虫，并用 M9 缓冲液洗涤 3–5 次。将线虫重悬于 M9 缓冲液中，用于后续神经元存活率和回避行为检测。
2. 琼脂糖垫的制备
   1. 将 2 g 琼脂糖加入 100 mL M9 缓冲液（2%，w/v），在微波炉中加热至接近沸腾。
   2. 将 0.5 mL 熔化的琼脂糖滴加到置于两块 2 mm 厚玻璃板之间的 1 mm 厚显微镜载玻片中央。垂直覆盖另一块载玻片。待琼脂糖冷却凝固后，轻轻移除上层载玻片。
3. ASH 神经元存活率检测
   1. 在琼脂糖垫上滴加一滴 20 mM 叠氮化钠。将 15–20 条 HA759 线虫转移至液滴中以固定其活动。
   2. 轻轻盖上盖玻片，将载玻片置于配备数码相机的荧光显微镜下。选择 40 倍物镜和 FITC 滤光片，用于检测线虫头部区域表达 GFP 的 ASH 神经元。
   3. 每组随机选取超过 50 条线虫，统计头部区域具有 GFP 标记的双侧 ASH 神经元的线虫数量。计算 ASH 神经元的存活率：
      神经元存活率 (%) =
      其中 N_survival 和 N_total 分别表示每组中具有 GFP 阳性 ASH 神经元的线虫数量和检测的总线虫数量。

材料