基于细胞阻抗的实时细胞过程监测分析

摘要

来源：Labadie, T.，等，利用实时细胞分析监测流感病毒在宿主外的存活情况。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们演示了实时监测细胞事件的过程，包括贴壁细胞的增殖 通过 一种细胞阻抗检测。在此检测中，贴壁细胞作为绝缘体，限制电极之间的电流流动，从而增加阻抗。

方案

注意：在整个实验过程中，始终将培养板置于非静电表面，例如包装用的纸张包裹物上。请遵循下文第1节，以确定在电子微孔板（设计为E-Plate）中接种细胞的最佳浓度。

1. 确定感染细胞所需的合适细胞数量

1. 实验前24小时，在75 cm² 培养瓶中培养MDCK（Madin-Darby犬肾）细胞，以获得刚传代的细胞（约80%汇合度）。
2. 用5 mL 1× PBS洗涤细胞，加入3 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液使细胞脱落。
3. 加入7 mL新鲜细胞培养基，使用自动细胞计数仪结合台盼蓝染色对细胞进行计数。
4. 用细胞培养基将细胞浓度调整为400,000个细胞/mL。在其他试管中进行连续两倍稀释，获得200,000；100,000；50,000；25,000；12,500；和6,250个细胞/mL的细胞密度。根据细胞类型及其生长特性，调整细胞的稀释范围。
5. 将E-板（材料表）置于室温下数分钟，使用多通道移液器向每孔加入100 µL细胞培养基。切勿触碰E-板上的电极。
6. 解锁支架，将E-板前端插入阻抗测量仪（材料表）的支架槽中，关闭培养箱门。
7. 打开软件。
   1. 在“默认实验模式设置”中，选择相应的支架，双击顶部页面，输入实验名称。点击“布局”，为板上每个选定孔输入必要的样品信息；完成后点击“应用”。点击“时间表”|“步骤”|“添加步骤”。软件将自动添加一个1秒的步骤，用于测量背景阻抗（CI）。
   2. 在“执行”选项卡中点击“开始/继续”。点击“绘图”，通过选择相应孔添加所有样品，并确保CI值在-0.1至0.1之间，然后进入下一步。
8. 将E-板从支架中取出。
9. 将步骤1.4中各细胞悬液各取100 µL，重复加入相应孔中；对照孔中加入100 µL细胞培养基。将E-板置于超净台中，室温静置30分钟，使细胞在孔底均匀分布。
10. 将E-板插入支架槽中。在软件中点击“时间表”|“添加步骤”，设置每30分钟监测一次细胞，共200次重复。然后选择“开始/继续”。
11. 通过点击软件中的“绘图”按钮查看并绘制CI数据。选择接种后24小时、尚未进入平台期的细胞浓度，以确保在病毒感染时细胞仍处于生长期。当CI达到最大值时，即进入平台期。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
E-Plate 16（6 个板）	ACEA Biosciences, Inc	5469830001	E-板有不同包装规格
PBS 1X	Life technologies (gibco)	14040091
TPCK-胰蛋白酶	Worthington	LS003740
xCELLigence 实时细胞分析仪 S16	ACEA Biosciences, Inc	380601310	xCELLigence RTCA S16 仪器有不同型号（16 孔、96 孔、单板或多板）
75 cm² 组织培养瓶	Falcon	430641U
MEM 1X	Life technologies (gibco)	31095029