基于细胞阻抗的病毒存活动力学检测方法

摘要

来源：Labadie, T. 等，利用实时细胞分析监测流感病毒在宿主外的存活情况。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频介绍了一种基于细胞阻抗的技术，用于研究可诱导细胞病变效应的病毒的存活动力学。该方法通过测量经生理盐水预处理的病毒感染贴壁细胞的电学阻抗来实现。

方案

1. 试剂和起始材料的准备

1. MDCK 细胞和无菌细胞培养基的制备
   1. 在添加了 10% 热灭活胎牛血清（FCS）以及抗生素（100 单位/mL 青霉素，100 mg/mL 链霉素）的改良 Eagle 培养基（MEM）中培养 Madin-Darby 犬肾（MDCK）细胞。
   2. 解冻后，感染前至少传代 2 次以确保细胞完全恢复（但传代次数少于 30 次，以避免细胞表型发生漂移）。
   3. 在含有 30 mL 无菌 1× MEM 的 75 cm²  组织培养瓶中接种 7.5 × 10⁶  个 MDCK 细胞，并在 37 °C、5% CO₂ 的湿化培养箱中孵育。
2. 阻抗监测设备的准备
   1. 将仪器置于 35 °C 的培养箱中，预热至少 2 小时。
   2. 将其连接到放置在培养箱外的控制单元。
   3. 在开始后续实验前，按照制造商推荐的程序进行清洁。
3. 在 MDCK 细胞上制备流感病毒（IAV）毒株
   1. 为扩增 H1N1 病毒，在两个 75 cm² 组织培养瓶中各接种 7.5 × 10⁶ 个 MDCK 细胞，并在 37 °C 下孵育 24 小时，使其达到 90%–100% 汇合度。<....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.25% 胰蛋白酶	ThermoFisher	25200056
75 cm² 组织培养瓶	Falcon	430641U
E-Plate 16（6 个板）	ACEA Biosciences, Inc	5469830001	E-板有不同包装规格
FCS	Life technologies (gibco)	10270-106
MEM 1X	Life technologies (gibco)	31095029
PBS 1X	Life technologies (gibco)	14040091
青霉素-链霉素	Life technologies (gibco)	11548876
TPCK-胰蛋白酶	Worthington	LS003740
xCELLigence 实时细胞分析仪 S16	ACEA Biosciences, Inc	380601310	xCELLigence RTCA S16 仪器有不同规格（16 孔、96 孔、单板或多板）