使用扫描电子显微镜定量膜褶皱形成

Abstract

来源:Ahn， W. et al.， 使用扫描电子显微镜可视化膜褶皱形成。J. Vis. Exp. （2021 年）

该视频演示了使用扫描电子显微镜 （SEM） 显示膜褶皱的巨噬细胞的样品制备、固定和成像。有关膜形态和组织的详细信息对于了解细胞的生理状况至关重要。

Protocol

1. 细胞系和细胞培养

1. 在补充有 10% （vol/vol） 热灭活胎牛血清 （FBS）、100 IU/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 （DMEM） 中培养 RAW 264.7 巨噬细胞在 37 °C 和 5% CO₂ 的加湿培养箱中。每隔一天更换一次生长培养基。
2. 当细胞达到 80% 汇合时，使用无菌 PBS 洗涤板两次。
3. 通过添加 1,000 μL 0.5% 胰蛋白酶-EDTA 分离细胞，并将细胞培养板在 37 °C 的加湿培养箱中孵育 3-5 分钟。
4. 在光学显微镜下检查板以确认细胞解离。加入 10 mL 含有 10% FBS 的生长培养基以灭活胰蛋白酶。
5. 将细胞悬液收集在 50 mL 锥形管中，并在室温下以 400 x g 离心 5 分钟。在完全细胞培养基中轻轻重悬细胞，并使用台盼蓝 （0.4%） 染色测定细胞计数和活力><。 注意:本实验推荐的最小细胞活力为 >90%。
6. 使用高压灭菌镊子将无菌玻璃盖玻片放入 24 孔板的孔中。以 1 x 10⁶ 个细胞/mL 的密度将细胞接种到盖玻片上，并在 37 °C 和 5% CO₂ 的加湿培养箱中孵育板过夜。
7. 处理前，用新鲜的 500 ....

Materials