活体荧光显微镜观察微血管血栓形成

摘要

来源：Strüder, D.，等。无毛小鼠耳叶内血栓诱导与活体显微观察。视觉化实验杂志（2017）

本视频展示了利用活体荧光显微技术在小鼠模型中研究血栓形成的方法。通过向小鼠注射荧光标记的多糖以监测血液循环。当耳部微血管受到高强度光照时，光毒性诱导产生损伤，进而导致血栓形成；通过观察血流阻塞现象可确认血栓的生成。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 实验动物的准备

1. 称重小鼠并给予相应药物（例如， 将大麻素（5 mg/kg 体重（bw））注入胰岛素注射器中，并在血栓诱导前 30 分钟给药。
2. 用拇指和食指夹住小鼠的颈部，小指夹住小鼠尾巴，将小鼠拉直，然后将药物注射至腹部左下象限的腹腔内（ip）。将动物放回笼中静置15分钟。
3. 使用氯胺酮（90 mg/kg 体重）和赛拉嗪（25 mg/kg 体重）配制麻醉剂。在血栓诱导前 15 分钟对小鼠进行麻醉。将小鼠放入笼中，轻轻拉出尾巴，使用胰岛素注射器经腹腔注射麻醉剂。
4. 将小鼠放回笼中，直至麻醉开始。为确认麻醉充分，用镊子夹捏小鼠尾巴。
5. 将0.05 mL解冻的异硫氰酸荧光素标记葡聚糖（FITC-dextran；5%，150 kDa）吸入胰岛素注射器中。填充注射器时，确保无气泡残留，因为即使少量经静脉（iv）注入的气泡也可能对动物造成致命影响。
6. 将麻醉后的小鼠俯卧位放置于加热板上，调节加热板温度至37 °C。
7. 在小鼠角膜上涂抹眼膏。对皮肤进行消毒，并使用无菌器械。
8. 在右耳的头侧和尾侧边缘各缝合一针7/0聚丙烯缝线。缝合位置应尽可能靠近边缘，并尽量靠近耳基部。图1B....

结果

图1. 颈静脉的准备（A）以及耳部在活体显微镜下的定位（B）。（A） 使用手术体视显微镜准备右侧颈静脉。在注射FITC-葡聚糖之前，先缝合用于固定左耳的缝线。先前解剖左侧颈静脉所造成的伤口采用经皮缝合方式闭合 （B）。左耳使用聚丙烯7/0缝线固定。小心放置盖玻片，避免压迫耳部基底血管。实验全程使用加热板维持动物的体温。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
SKH-1/hr 小鼠	Charles River	477	可从其他供应商购买
手术体视显微镜	Leica	M651/M655	可从其他供应商购买
活体显微镜	Zeiss	Axiotech Vario 100	可从其他供应商购买
物镜 (20x/0.95)	Zeiss	20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR	可从其他供应商购买
物镜 (63x/0.95)	Zeiss	63x/0,95 W; ACHROPLAN	可从其他供应商购买
黑白CCD相机	Pieper	FK 6990 IQ-S	可从其他供应商购买
DVD录像机	Panasonic	DMR-EX99V	可从其他供应商购买
氯化钠	Braun	5/12612055/1011	可从其他供应商购买
10% 氯胺酮	Bela pharm	F3901-6	可从其他供应商购买
2% 赛拉嗪	Bayer	6293841.00.00	可从其他供应商购买
5% FITC-葡聚糖	Sigma	46945-100MG-F	可从其他供应商购买
5% 泛醇眼膏	Bayer	6029009.00.00	可从其他供应商购买
DMSO	Sigma	472301	可从其他供应商购买
盖玻片 5 × 5 × 1 mm	Menzel	L4339	可从其他供应商购买
胶带	Leukosilk	4683400	可从其他供应商购买
棉签	Sanyo	604-A-1	可从其他供应商购买
红外灯	Beurer	5/13855	可从其他供应商购买
一次性注射器	Braun	2020-08	可从其他供应商购买
胰岛素注射器	Braun	9161502	可从其他供应商购买
一次性皮下注射针头	Braun	465 7640	可从其他供应商购买
端对端毛细管	Sarstedt	19,447	可从其他供应商购买
加热板	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	可从其他供应商购买
14.5 cm 剪刀	Aesculap	BC259R	可从其他供应商购买
持针器	Aesculap	BM081R	可从其他供应商购买
显微镊	Aesculap	BD331R	可从其他供应商购买
显微剪	Aesculap	OC496R	可从其他供应商购买
21号手术刀	Dahlhausen	11.000.00.511	可从其他供应商购买
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	可从其他供应商购买
电凝器	Servoprax	H40140	可从其他供应商购买
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