利用机械解离法从小鼠背根神经节中分离巨噬细胞

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摘要

来源：Yu, X., 等背根神经节巨噬细胞的快速分离。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了一种无需使用酶的机械解离技术，用于从小鼠背根神经节（DRG）中分离巨噬细胞。在对新鲜采集的DRG组织进行匀浆处理后，使用针对巨噬细胞表面受体的抗体对细胞进行荧光标记，随后通过流式细胞术确认样本中巨噬细胞的存在。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

所有动物实验均经加州大学旧金山分校机构动物护理和使用委员会批准，并依照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》进行。

1. 采集实验小鼠的腰段背根神经节

实验开始前，通过将9体积的密度梯度介质（如Percoll）与1体积的Ca⁺⁺/毫克⁺⁺无钙镁10倍HBSS。置于冰上。
用2.5%阿佛丁麻醉小鼠。通过轻捏后肢足垫无反应确认动物已完全麻醉。
注意使用6至8周龄的雄性和雌性小鼠。
用10 mL预冷的1×PBS对小鼠进行心脏灌注。
1. 将小鼠仰卧位固定于通风橱内，用胶带固定四肢。用镊子提起肋骨下方的皮肤，用手术剪做一小切口，暴露肝脏和膈肌。
2. 继续使用剪刀剪开膈肌和肋骨笼，打开胸膜腔以暴露跳动的心脏。
3. 用虹膜剪迅速剪开右心耳。观察到出血后，将30 G针头插入左心室后端，缓慢注入10 mL预冷的1×PBS，以灌注动物。
进行背侧椎板切除术在俯卧位的小鼠上。
注意：

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材料

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