从小鼠派伊尔集合淋巴结中分离淋巴细胞

摘要

来源：Yazicioglu, Y. F.，等。揭示体液免疫的关键参与者：从小鼠派伊尔集合淋巴结中分离淋巴细胞的先进优化方案。J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们演示了从小鼠收获的派伊尔集合淋巴结中分离淋巴细胞的方法。分离得到的淋巴ocytes可用于后续分析。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 手术切除和组织制备步骤：

1. 小肠（SI）的手术切除
   1. 使用 CO₂ 窒息法或机构动物伦理委员会批准的任何等效方法处死小鼠。
   2. 将小鼠转移至专用的手术切除区域。使其背部朝下放置，并用 70% 乙醇对腹部进行消毒。沿中线从耻骨至肋骨处切开腹壁皮肤和腹膜，打开腹腔。
      注意：初次切口应选择在皮肤较小区域进行，以避免穿透腹腔并损伤肠组织。继续切开直至达到所需的解剖边界。
   3. 识别盲肠，其为检测回肠末端（小肠远端部分）的理想解剖标志。
      注意：盲肠通常位于小鼠腹部的左下侧。
   4. 精确定位回盲交界处，并尽可能在远端水平进行切割，以分离小肠与盲肠。在后续步骤中，应避免过度接触肠壁，因为脆弱的派伊尔结（PPs）在触碰时容易塌陷。
   5. 使用剪刀剪断肠系膜，轻柔地将整个小肠从盲肠端取出直至幽门括约肌。识别幽门与十二指肠的交界处，并在此水平剪断十二指肠，从而完全将小肠从腹腔中分离。
      注意：(i) 避免过度拉伸，以免导致肠壁破裂。 (ii) 若除派伊尔结淋巴细胞....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
6孔，12孔 &和 96 孔板	Falcon/Corning	353046,353043/3596
50 ml 离心管	Falcon	3520
40 µm细胞滤筛	Falcon	352340
10 ml 注射器-活塞	Exel INT	26265
RPMI	康宁	15-040-CV
PBS	康宁	21-040-CM
FBS	Atlanta Biologicals	S11150
轨道摇床	VWR	Model 200
弯头剪刀
精细锯齿镊
小型弯剪