从人血沉棕黄层中分离外周血单个核细胞

摘要

来源：Mily, A., 等 人源单核细胞来源的M1与M2型极化及流式细胞术分析 结核分枝杆菌 感染。 视频实验杂志 (2020)

在本视频中，我们演示了通过密度梯度离心法从人血沉棕黄层中分离外周血单个核细胞（PBMCs），其中包括单核细胞和淋巴细胞。分离得到的PBMCs可用于后续分析。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际关于人类福祉的指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 培养基的制备

注意： 所有试剂和耗材的详细信息均在材料表中提供。

1. RPMI 完全培养基：在 RPMI 1640 培养基中添加 1 mM 丙酮酸钠、2 mM L-谷氨酰胺、10 mM HEPES 和 10% 热灭活胎牛血清（FBS）。在进行结核分枝杆菌（Mtb）感染实验时，避免在细胞培养基中使用抗生素。
2. 无血清 RPMI 培养基：在 RPMI 1640 培养基中添加 1 mM 丙酮酸钠、2 mM L-谷氨酰胺和 10 mM HEPES。

2. 从血沉棕黄层分离外周血单个核细胞

注意：所有涉及人血（可能具有传染性）的操作均须在二级生物安全柜内进行。丢弃前，需用消毒剂处理残留血液制品至少15分钟以使其失活。本实验所用血液来自健康志愿者。本体外巨噬细胞分化方案设定为每名供体每孔接种10 × 10⁶个分离的外周血单个核细胞（PBMCs）。每名供体的一管血沉棕黄层（buf....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
淋巴细胞分离液（Lymphoprep）	Alere Technologies AS	11508545
RPMI 1640 培养基	Life Technologies Corporation	SH30096.01
EDTA (0.5 M)	卡罗林斯卡大学医院，胡丁厄	N/A
丙酮酸钠（Na-pyruvate）	GE Healthcare Life Sciences	SH300239.01
L-谷氨酰胺（L-Glutamine）	GE Healthcare Life Sciences	SH30034.01
HEPES 缓冲液	GE Healthcare Life Sciences	SH30237.01
胎牛血清（Fetal bovine serum, FBS）	Sigma-Aldrich	F7524