从小鼠胫骨中分离和培养骨髓基质细胞

摘要

来源：Maridas, D. E.，等。小鼠骨髓基质细胞与破骨细胞前体的分离、培养及分化。J. Vis. Exp.(2018)

在本视频中，我们演示从小鼠长骨中分离和培养骨髓基质细胞的方法。分离得到的贴壁BMSCs可用于后续分析。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠骨骼的采集

1. 使用 CO 终止动物生命₂ 随后进行颈椎脱位，并用70%乙醇喷洒。
   注意： 确保使用同性别且尽可能同龄的动物。我们通常使用7至8周龄的动物。建议将每实验组至少3只动物的细胞进行合并，以获得更具代表性且可重复的细胞群体。
2. 将已处死的小鼠仰卧置于解剖板上。用镊子在腹部提起皮肤形成帐篷状，使用无菌解剖剪做一小切口（约1 cm）。从切口处将皮肤向四肢和足部方向剥离，以暴露下腹部和腿部。
   1. 在踝关节下方切断以去除足部。沿髋部的髂嵴切开，使股骨头与髋骨分离。保持小鼠仰卧位，在髋骨中线处做切口，以分离两侧髂骨。
3. 使用无绒布小心地从股骨、胫骨和髂骨上剥离肌肉。
   注意： 尽可能多地剪除骨骼上的肌腱和肌肉，可使后续使用无绒布擦拭时清洁更快速、更简便（例如，Kim 擦拭）。操作骨骼时需格外小心，因为骨骼容易断裂，且某些基因型可能会进一步增加其脆弱性。
4. 所有样品解剖完成后，将其置于冰上的磷酸盐缓冲液（PBS）中，并转移至无菌培养罩内，以进行后续的分离步骤。
   ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
200μL移液器吸头	Rainin	17014401	塑料耗材
1.5 mL离心管	USA Scientific	1615-5500	塑料耗材
15 mL锥形管	VWR	89039-668	塑料耗材
50 mL锥形管	VWR	89039-660	塑料耗材
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma-Aldrich	21-040-CM	试剂
乙醇	Fisher Science	04-355-451	试剂
解剖工具
70μm滤器	BD Falcon	352350
0.25%胰蛋白酶	Gibco	25200	试剂
吸水纸（Kimwipe）	VWR	82003-820