体外小鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞的分化

摘要

来源：Maridas, D. E. 等，小鼠骨髓基质细胞与破骨细胞前体的分离、培养及分化 J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了骨髓基质细胞（BMSCs）向脂肪细胞的分化过程。该过程分为两步：在特定生长因子和激素存在下，未分化的BMSCs首先分化为前脂肪细胞；第二步通过葡萄糖和胰岛素处理，最终形成含有多个脂滴的成熟脂肪细胞。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 收集管的准备

1. 通过在最低必需培养基α（MEM α）中添加10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，制备骨髓间充质干细胞（BMSC）培养基。
2. 将100 µL BMSC培养基加入1.5 mL微量离心管中。通常每根管可容纳3块骨组织，因此请根据需要准备相应数量的管子。
3. 将200 µL移液器吸头的末端剪去适当长度，使其能够放入离心管中。将吸头插入管内，并确保管盖能够关闭，然后将管子置于冰上。
   注意：也可将末端剪去的0.75 mL微量离心管插入1.5 mL微量离心管中。

2. 小鼠骨骼的采集

1. 使用 CO₂ 处死动物₂ 随后进行颈椎脱位，并用70%乙醇喷洒。
   注意： 确保使用同性别且尽可能同年龄的动物。我们通常使用7至8周龄的动物。建议将每实验组至少3只动物的细胞进行合并，以获得更具代表性且可重复的细胞群体。
2. 将安乐死的小鼠仰卧置于解剖板上。用镊子在腹部提起皮肤形成帐篷状，使用无菌解剖剪做一个约1 cm的小切口。从切口处将皮肤向四肢和足部剥离，以....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
200μL 移液器吸头	Rainin	17014401
1.5 mL 离心管	USA Scientific	1615-5500
15 mL 锥形管	VWR	89039-668
50 mL 锥形管	VWR	89039-660
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma-Aldrich	21-040-CM
乙醇	Fisher Science	04-355-451
解剖工具
70μm 滤膜	BD Falcon	352350
0.25% 胰蛋白酶	Gibco	25200
吸水纸（Kimwipe）	VWR	82003-820
MEMα	Gibco	12571
胎牛血清	VWR	97068-085
青霉素/链霉素	Invitrogen	15140-122
DMEM 高糖培养基	Sigma-Aldrich	D5796
罗格列酮	Cayman Chemical	717410
胰岛素	Sigma-Aldrich	I6634
IBMX	Sigma-Aldrich	I5879
地塞米松	Sigma-Aldrich	D4902
Axio Observer 倒置显微镜	Zeiss