使用浮力激活细胞分选进行基于浮选的 T 细胞分离

Abstract

来源:Snow， T. 等人 使用微泡从人外周血单核细胞样品中分离、活化和扩增基于浮选的 T 细胞。 （2022 年）

该视频演示了使用功能化浮力激活细胞分选 （BACS） 技术从外周血单核细胞 （PBMC） 中分离 T 细胞。分离技术包括通过用生物素化的抗 CD3 抗体标记细胞并使用链霉亲和素结合的微泡分离抗体结合的细胞来对 CD3+ T 细胞进行阳性选择。

Protocol

1. 使用阳性选择分离带有微泡的 T 细胞

注意:该方案详细介绍了一种使用 SAMB 的小规模 CD3 ⁺ 阳性选择方法。

1. 将 3 x 10⁸ 个市售 PBMC 与 2.5 mL 分离缓冲液与浓度为每 100 万个细胞 25 ng 抗体 （25 ng/M） 的生物素化抗 CD3 （OKT3） 抗体一起孵育。上下吹打轻轻混匀，并在室温下孵育 10 分钟。
2. 根据制造商报告的 SAMB 浓度，以 0.5（SAMB 数量）:1（细胞数量）的比例添加链霉亲和素微泡 （SAMB）。
3. 在室温下使用商用端到端 （EOE） 旋转器以 20 rpm 混合 10-15 分钟。在室温下以 400 x g 离心 5 分钟。
4. 离心后，阳性选择的细胞将与 SAMB 一起位于悬浮液的顶部。剩余的未选择细胞将位于试管底部的细胞沉淀中。使用 9 英寸玻璃移液器，将尖端插入气泡池层下方的试管底部，用电动移液器吸出细胞沉淀和底清液，然后将它们转移到新试管中。

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Materials