基于浮力激活细胞分选的T细胞分离技术

摘要

来源：Snow, T.，等。利用微泡从人外周血单个核细胞样本中进行基于浮力的T细胞分离、活化与扩增。视觉化实验杂志（2022）

本视频展示了利用功能化浮力激活细胞分选（BACS）技术从外周血单个核细胞（PBMCs）中分离T细胞的方法。该分离技术通过使用生物素标记的抗CD3抗体对细胞进行标记，并利用链霉亲和素结合的微泡分离抗体结合的细胞，从而实现CD3+ T细胞的阳性筛选。

方案

1. 使用微泡通过阳性选择分离T细胞

注意：本方案详细介绍了使用 SAMBs 进行小规模 CD3⁺ 阳性筛选的方法。

1. 将3 × 10⁸个商业获取的外周血单个核细胞（PBMCs）与2.5 mL分离缓冲液及生物素标记的抗CD3（OKT3）抗体混合，抗体终浓度为每百万个细胞25 ng（25 ng/M）。用移液器轻柔吹打混匀，室温孵育10分钟。
2. 根据生产商提供的链霉亲和素微泡（SAMBs）浓度，按0.5（SAMB数量）:1（细胞数量）的比例加入链霉亲和素微泡（SAMBs）。
3. 使用商用的翻转混合仪（end-over-end, EOE）在室温下以20 rpm转速混合10–15分钟。随后在室温下以400 × g离心5分钟。
4. 离心后，被正向选择的细胞将与SAMBs一起位于悬液上层，未被选择的剩余细胞则形成沉淀位于管底。使用9英寸玻璃移液管，将管尖插入气泡-细胞层下方至管底，用电子移液器吸取细胞沉淀及下层液体，并转移至新管中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
生物素标记抗人 CD3（OKT3）抗体	Biolegend	317320
白细胞分离物（Leukopak）	BioIVT	HUMANLMX100-0001129
正常人外周血单个核细胞（PBMCs）	BioIVT	HUMANHLPB-0002562
链霉亲和素微泡分离试剂盒（包含 Akadeum 的分离缓冲液）	Akadeum	11110-000