从小鼠肝脏中分离边缘池白细胞

摘要

来源：Sorski, L.，等。边缘性肝白细胞的选择性采集。J. Vis. Exp. (2016)

在本视频中，我们演示了通过强制灌流法从小鼠肝脏中分离边缘池肝白细胞。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠实验方案

1. 肝脏灌注及MH-白细胞的收集
   1. 使用过量的8%异氟烷处死动物。作为预防措施，在打开胸腔前，将含有浸有异氟烷垫片的15 ml离心管置于小鼠头部周围。
   2. 将小鼠四肢固定于操作台。
   3. 在呼吸停止后立即切开腹腔和胸腔，暴露肝脏和心肺复合体，同时保持膈肌下部完整（以形成引流的胸腔积液池）。此过程中应避免出血。
      1. 具体操作时，从腹部中线下端开始切口，避免损伤内脏器官，然后沿对角线向两侧肋骨方向切开，并继续向上至胸腔上部水平。
   4. 将肠管拉出并移至实验者右侧体外，以暴露门静脉。
   5. 将连接至蠕动泵的30号针头插入脾静脉前方的门静脉内。
   6. 在膈肌上方剪断下腔静脉，以便灌注液从胸腔引流并收集。
   7. 启动蠕动泵，流速约为3 ml/min，轻柔收集最初从胸腔积液池流出的3 ml灌注液（含血液污染）。
   8. 弃去该部分灌注液。如有需要，可用生理盐水重复上述清洗步骤一次，之后再开始收集肝脏灌注液。
   9. 重新启动灌注，流速可增至最高4 ml/min，使用连接注射器的蝶形针从胸腔收集10 ml灌注液。
   10. 当肝脏颜色变为浅棕色时，终止灌注。

2. 白细胞提取

1. 将灌注液在 400 x g 条件下离心 10 分钟。
2. 吸除上清液。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Autoclud 蠕动泵
蝶形针	OMG		26G
蝶形针	OMG		21G*3/4"
注射器	Pic 溶液		1 ml
注射器	Pic 溶液		2.5 ml
注射器	Pic 溶液		5 ml
注射器	Pic 溶液		10 ml
注射器	Pic 溶液		25 ml
钝头镊
剪刀
止血钳
组织镊