基于纳米颗粒的抗原特异性CD8+ T细胞富集与扩增

摘要

来源：Hickey, J. W.，等。利用磁性纳米颗粒富集与扩增稀有抗原特异性T细胞。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频介绍了一种利用磁性纳米颗粒为基础的磁性人工抗原提呈细胞（aAPCs）分离稀有抗原特异性CD8+ T细胞的实验方案，该aAPCs经抗原肽负载的MHC-Ig复合物及抗CD28抗体功能化修饰。aAPCs可特异性结合表达靶向该抗原肽的T细胞受体的CD8+ T细胞，并实现其后续扩增 体外，导致该 CD8+ T 细胞群体的富集与扩增。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 使用制备的纳米颗粒人工抗原呈递细胞富集抗原特异性CD8+ T细胞。

1. 分离 CD8+ T 细胞。
   1. 通过暴露于异氟烷后行颈椎脱位法对动物实施安乐死。
   2. 从野生型 C57BL/6j 小鼠中取出脾脏和淋巴结，并将其置于 PBS 溶液中。研磨组织，并用 PBS 频繁冲洗，使细胞通过无菌的 70 µm 细胞筛滤器。
   3. 为去除非 CD8+ T 细胞，使用非接触式 CD8+ T 细胞分离试剂盒，并按照制造商说明书操作。
      注意：每种抗原条件至少需要 3 × 10⁶ 个 CD8+ T 细胞。
2. 加入纳米颗粒人工抗原呈递细胞（aAPCs），使其与 CD8+ T 细胞结合。
   1. 分离后，将细胞浓缩至 100 µL PBS（含 0.5% 牛血清白蛋白（BSA）和 2 mM EDTA）中。
   2. 根据每 10⁶ 个 CD8+ T 细胞加入 10¹¹ 个与 aAPC 结合的肽段负载型 MHC-Ig 的比例，计算所需添加的 aA....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DimerX I：重组可溶性二聚体人 HLA-A2:Ig 融合蛋白	BD Biosciences	551263
DimerX I：重组可溶性二聚体小鼠 H-2D[b]:Ig	BD Biosciences	551323
DimerX I：重组可溶性二聚体小鼠 H-2K[b]:Ig 融合蛋白	BD Biosciences	550750
nanomag-D-spio，NH2，100 nm 纳米颗粒	Micromod	79-01-102
96 孔半面积黑色聚苯乙烯微孔板	Corning	3875
Super Mag NHS 活化磁珠，0.2 µm	Ocean Nanotech	SN0200
Anti-Biotin MicroBeads UltraPure	Milteny	130-105-637
EZ-Link NHS-Biotin	ThermoFisher	20217
C57BL/6J（B6 野生型）小鼠	Jackson Laboratory	664
CD8a+ T 细胞分离试剂盒，小鼠	Miltenyi	130-104-075
MS 柱	Milteny	130-042-201
LS 柱	Milteny	130-042-401
链霉亲和素-藻红蛋白，SAvPE	Biolegend	405203
直径 0.75 英寸的 N52 圆盘磁铁	K&J Magnetics	DX8C-N52
APC 标记抗小鼠 CD8a 抗体，克隆 53-6.7	Biolegend	100711
LIVE/DEAD 可固定绿色死细胞染色试剂盒，适用于 488 nm 激发	ThermoFisher	L-34969