来源：Hoffmann, S. H. L., 等., 小鼠淋巴细胞标记 64铜-抗体受体靶向 体内 细胞迁移的PET/CT成像 视频实验杂志 (2017)
在本视频中，我们演示了使用放射性同位素偶联的单克隆抗体对辅助性T细胞进行细胞内放射标记，以实现无创的正电子发射断层扫描成像。
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方法文章
使用放射性标记单克隆抗体标记小鼠辅助性T淋巴细胞
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
1. cOVA-TH1 细胞的放射性标记
注意：将 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 应用于培养的 cOVA-TH1 细胞，以实现细胞内放射性标记。
- 进行cOVA-TH1细胞放射性标记时，使用剂量校准仪吸取37 MBq的放射性标记物64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb，装入无死腔的注射器中。加入1 mL生理盐水，配制成浓度为37 MBq/mL的溶液。
- 将cOVA-TH1细胞重悬于培养基中，调整细胞密度至2 × 106 个细胞/mL，并向每孔加入0.5 mL细胞悬液至48孔板中。
- 向48孔板的每孔中加入20 µL新配制的37 MBq/mL 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb溶液。最终标记条件为每520 µL体系中，每106 个细胞对应0.7 MBq。于37 °C、7.5% CO2条件下孵育30分钟。
- 孵育结束后，小心吹打混匀各孔中的细胞，将细胞悬液从48孔板转移至50 mL螺口离心管中。为尽量减少细胞损失，使用预温的培养基冲洗每个孔。
- 将cOVA-TH1细胞悬液在400 × g条件下离心5分钟，弃去上清液，用10 mL预温的PBS重悬细胞。取部分细胞悬液用于细胞计数。重复洗涤步骤一次。
- 使用台盼蓝染色法，在适当稀释倍数下计数活cOVA-TH1细胞数量。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 64Cu 工作模块 | WKL | 定制生产 | 64Cu 制备 |
| 剂量校准仪 | Capintec | CRC-25R | |
| PETtrace 回旋加速器 | 通用电气医疗系统公司 | ||
| DOTA-NHS | Macrocyclics | B-280 | |
| 抗 cOVA-TCR 抗体（KJ1-26） | 由杂交瘤细胞培养分离获得 | DOTA 偶联 | |
| Na2HPO4 | Sigma-Aldrich | 71633 | DOTA 偶联 |
| H+ Chelex 100 | Sigma-Aldrich | C7901 | DOTA 偶联 |
| Amicon Ultra-15 滤膜离心管 | Merck Millipore | UFC910008 | DOTA 偶联 |
| Rotipuran 超纯水 | Carl Roth | HN68.3 | DOTA 偶联 |
| 乙酸铵 | Sigma-Aldrich | 32301 | DOTA 偶联 |
| PBS | 图宾根大学 | DOTA 偶联 | |
| Micro Bio-spin P-6 层析柱 | Bio-Rad Laboratories | 7326221 | DOTA 偶联 |
| 柠檬酸钠 | Sigma-Aldrich | 71497 | DOTA 偶联 |
| Cyclone Plus 磷光成像仪 | Perkin-Elmer | L2250116 | DOTA 偶联 |
| DMEM | Merck Millipore | 102568 | T 细胞培养基组分 |
| FCS | Merck Millipore | S0115/1004B | T 细胞培养基组分 |
| 丙酮酸钠 | Merck Millipore | L0473 | T 细胞培养基组分 |
| MEM 氨基酸溶液 | Merck Millipore | K0293 | T 细胞培养基组分 |
| HEPES | Merck Millipore | L 1613 | T 细胞培养基组分 |
| 青霉素/链霉素 | Merck Millipore | A2212 | T 细胞培养基组分 |
| 0.05 mM 2-β-巯基乙醇 | Sigma-Aldrich | M3148 | T 细胞培养基组分 |
| DO11.10 小鼠 | 本单位繁育 | TH1 细胞培养 | |
| DPBS | Gibco | 14190144 | TH1 细胞培养 |
| 40 µm 细胞筛 | Corning | 352340 | TH1 细胞培养 |
| ACK 裂解缓冲液 | Lonza | 10-548E | TH1 细胞培养 |
| CD4 微珠，小鼠 | Miltenyi Biotech | 130-097-145 | TH1 细胞培养 |
| QuadroMACS 分离器 | Miltenyi Biotech | 130-090-976 | TH1 细胞培养 |
| LS 层析柱 | Miltenyi Biotech | 130-042-401 | TH1 细胞培养 |
| 抗 CD4 抗体（Gk1.5） | 由杂交瘤细胞培养分离获得 | TH1 细胞培养 | |
| 抗 CD8 抗体（5367.2） | 由杂交瘤细胞培养分离获得 | TH1 细胞培养 | |
| 抗大鼠抗体（MAR18.5） | 由杂交瘤细胞培养分离获得 | TH1 细胞培养 | |
| 兔补体 MA | tebu-Bio | CL3221 | TH1 细胞培养 |
| 抗 IL-4 抗体（11B11） | 由杂交瘤细胞培养分离获得 | TH1 细胞培养 | |
| cOVA 323-339 肽段 | EMC-micro-collections | 定制订购 | TH1 细胞培养 |
| CPG1668 寡核苷酸 | Eurofins MWG Operon | 定制订购 | TH1 细胞培养 |
| IL-2 | 诺华公司 | 65483-116-07 | TH1 细胞培养 |
| 96 孔板 | Greiner | 655180 | TH1 细胞培养 |
| 24 孔板 | Greiner | 662160 | TH1 细胞培养 |
| 细胞培养瓶 | Greiner | 660175 | TH1 细胞培养 |
| 48 孔板 | Greiner | 677 180 | 细胞标记 |
| Gammacell 1000 | Best Theratronics | 通过咨询获取 | |
| Gulmay RT225 | Gulmay | 通过咨询获取 | |
| 台盼蓝 | Merck Millipore | L6323 | 体外评估 |
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