一种用于离体成像的收获小鼠腘窝引流淋巴结的解剖方法

摘要

来源：Rezende, R. M.，等。利用离体共聚焦显微镜观察淋巴结结构及细胞定位。 J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了一种从小鼠后肢分离并收获腘窝引流淋巴结的解剖技术。淋巴结在连接先天免疫与适应性免疫中发挥关键作用，获取结构完整、组织结构保存良好且细胞活性完好的淋巴结，有助于研究局部和全身的免疫应答。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 切除引流腘窝淋巴结的手术操作

1. 使用 CO₂ 窒息法处死小鼠，随后进行颈椎脱位。
2. 将小鼠俯卧位固定在亚克力板上，用胶带固定，并用棉签在小腿和膝关节处涂抹石蜡油（图 1A-D）。
3. 从小鼠足跟至膝关节沿中线在小腿处做一纵向切口（图 1E, F）。
4. 将小腿肌肉组织与皮肤分离（图 1F, G）。
5. 暴露腘窝（图 1G）。腘淋巴结在腘窝中呈现为一个半透明的球形结构。
6. 使用显微外科弯镊摘除腘淋巴结（图 1G）。
7. 或者，将小鼠翻转为仰卧位，于股二头肌与半腱肌之间进入腘窝，通过从小腿足跟至膝关节做中线切口，随后分离小腿肌肉与皮肤，以摘除腘淋巴结。
   注意：腘窝是位于膝关节后方的一个浅凹陷区域。需小心切开，以便观察腘淋巴结。

结果

图 1：腘淋巴结制备。（A, B）将 FACS 抗体主混合液皮下注射至足垫。（C, D）注射后 3 小时，处死小鼠，用胶带将小鼠固定在丙烯酸板上（C），并在腹部皮肤上涂抹矿物油，以防止切口周围残留毛发（D）。（E）从小鼠脚跟至膝盖沿小腿中线做切口。（F）暴露腘窝。（G）使用显微外科弯镊取出腘淋巴结。（H）将器官置于培养皿中，去除周围脂肪组织，将器官居中放置于培养皿中央，用一片精细擦拭纸覆盖器官，并持续用 0.9% 温热生理盐水或 ...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Cellview 培养皿	Greiner-Bio	627861	35x10 mm，带玻璃底
Kimwipes 擦镜纸	Kimtech Science 品牌	7557	尺寸 21 x 20 cm / 每盒 100 张
显微外科弯头镊子	WEP 外科器械	定制	12.5 cm
显微外科弯头剪刀	WEP 外科器械	定制	11.5 cm