通过脑池内递送脑膜炎奈瑟菌至小鼠模型以诱导脑膜炎奈瑟菌性脑膜炎

摘要

来源：Pagliuca, C.，等，通过小脑池注射诱导小鼠C群脑膜炎球菌性脑膜炎。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们演示了将脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）通过小脑延髓池注射的方式递送至小鼠模型，以建立脑膜炎感染模型。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠脑池内注射

注意：整个操作过程均在层流柜中进行，以维持无菌条件。

1. 在特定无病原体条件下饲养实验室小鼠（8周龄，雌性Balb/c），提供颗粒饲料和水 随意摄取.
2. 在开始实验前，将动物置于新环境中适应1周。
3. 实验开始前，称重并测量其体温。
   注意： 八周龄的近交系Balb/c雌性小鼠平均体重约为19 g。实验小鼠的生理体温正常范围为36–38 °C。
4. 用手指捏住动物颈部皮肤，以70%乙醇清洁腹部区域，使用25 G（0.5 mm × 16 mm）针头在小鼠腹部右下象限进行腹腔注射铁右旋糖酐（溶于1%磷酸盐缓冲液，250 mg/kg），注射时间约为感染前2–3小时。
   注意： 在小鼠腹部右下象限进行腹腔注射，以避免损伤膀胱、盲肠等腹腔器官。在感染前向动物给予外源性铁剂（以右旋糖酐铁形式）可促进细菌在宿主体内的增殖。
5. 2–3 小时后，使用氯胺酮（50 mg/kg）和赛拉嗪（3 mg/kg）对动物进行麻醉，并使用眼用润滑剂。
6. 通过捏压....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
报警温度计	TESTO	9000530	设备
BD 微细胰岛素注射器	BD	320837	U-100 胰岛素
BD Plastipak 注射器 1ml 25GA 5/8英寸	BD	300014	05x16mm
BD Plastipak 注射器 5ml	BD	308062	07 x 30mm
BIOHAZARD AURA B 垂直层流生物安全柜	Bio Air s.c.r.l.	Aura B3	设备
C150 CO2 培养箱	Binder	9040-0078	设备
标准饲料认证	Mucedola s.r.l.	4RF21	动物用颗粒饲料
Dumont Hp 镊子 5号 不锈钢	F.S.T. by DUMONT	AGT5034	尖端尺寸 0.10 x 0.06 mm
电子天平	Gibertini	EU-C1200	最大称量 1200g，d=0.01g，T=-1200g
右旋糖酐铁溶液	Sigma-Aldrich	D8517-25ML
氯胺酮	Intervet
微生物安全柜 BH-EN 和 BHG II 级	Faster	BH-EN 2004
微量离心管 1.5ml	BRAND	PP780751	螺口聚丙烯管，带刻度
小鼠操作镊	F.S.T.	11035-20	带锯齿橡胶头；夹持面：15 x 20 mm
天然乳胶手套	Medica	M101
Touch N Tuff 一次性丁腈手套	Ansell	92-500
赛拉嗪	Intervet