监测小鼠感染模型中中性粒细胞募集动态及细菌负荷

摘要

来源：Anderson, L. S., 等. 一种用于评估对Staphylococcus aureus感染先天免疫反应的小鼠模型. J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示 体内 利用成像技术研究免疫缺陷型转基因小鼠感染部位中表达GFP的中性粒细胞的募集动态。该方法包括注射发光细菌以引发感染，进而诱导中性粒细胞向感染部位募集，并通过成像技术对其进行追踪。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠来源与饲养

1. 在 C57BL/6J 遗传背景下培育 LysM-eGFP 小鼠。通过将 C57BL/6J 背景的 LysM-EGFP 小鼠与 MyD88^-/- 小鼠杂交，获得 LysM-EGFP×MyD88^-/- 小鼠。
2. 将小鼠饲养于动物实验设施中。在本研究中，动物术前于加利福尼亚大学戴维斯分校以群养方式饲养，术后单笼饲养。使用年龄在 10–16 周之间的小鼠。

2. 细菌制备与定量

1. 移除生物发光信号 S. aureus 从-80 °C保存条件下取出目标菌株，在冰上解冻。在5%牛血琼脂平板上划线接种。将划线后的平板置于37 °C湿润培养箱中过夜（16 h）培养。
   注意： 在本实验方案中，使用了 ALC2906 SH1000 菌株。该菌株含有穿梭质粒 pSK236，其上带有与青霉素结合蛋白 2 启动子融合的 luxABCDE 报告基因盒从 Photorhabdus luminescens.
2. 将胰蛋白胨大豆肉汤（TS....

结果

图1：OD之间的相关性₆₀₀ 以及 ALC2906 的 CFU 计数。 从琼脂平板上挑取3-4个ALC2906 SH1000菌落，转移至含10 µg/mL氯霉素的TSB培养基中过夜培养。次日，将菌液按1:50比例分装至含10 µg/mL氯霉素的TSB培养基中继续培养。于600 nm波长处测定光密度（OD₆₀₀) 在2小时后定期使用分光光度计测定。每次测定时，将细菌用预冷的PBS稀释1:100,000，分装至琼脂平板，过夜培养。次日计数菌落形成单位（CFU），以计算初始浓度，并与OD相关联₆₀₀n = 3.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
14 mL 聚丙烯圆底管	Falcon	352059
6mm 一次性活检穿孔器	Integra Miltex	33-36
生物发光 S. aureus	Lloyd Miller，约翰斯·霍普金斯大学	ALC 2906 SH1000
5% 牛血琼脂，Hardy Diagnostics	VWR	10118-938
盐酸丁丙诺啡注射液	西方医疗用品公司	7292	0.3 mg/mL
C57BL/6J 小鼠	杰克逊实验室	664
氯霉素（结晶粉末）	Fisher BioReagents	BP904-100
DPBS (1X)	Gibco	14190-144
胰岛素注射器	Becton, Dickson and Company	329461	0.35 mm（28 G）× 12.7 mm（1/2″）
IVIS Spectrum 在体实验 成像系统	Perkin Elmer	124262
Living Image 软件 – IVIS Spectrum 系列	Perkin Elmer	128113
LysM-eGFP 小鼠	Thomas Graff 阿尔伯特·爱因斯坦医学院，纽约	NA
微量分光光度计	ThermoFisher Scientific	ND-2000
MyD88 基因敲除小鼠	杰克逊实验室	9088
无纺海绵	AMD- Ritmed 公司	A2101-CH	5 cm × 5 cm
聚维酮碘 10% 溶液	Aplicare	697731
胰蛋白胨大豆肉汤	Becton, Dickson and Company	211825