一种在小鼠模型中诱导眼表炎症的方法

摘要

来源:Singh， J. 等人。诱导眼表炎症和受累组织的收集。J. Vis. Exp.（2022 年）

该视频演示了一种在小鼠模型中诱导眼表炎症和睑板腺功能障碍的方法。使用免疫原刺激小鼠的免疫系统，然后使用相同的免疫原再刺激，促进眼表炎症，导致中性粒细胞产生的 aggNET 堵塞睑板腺分泌，导致干眼症。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 诱导小鼠眼表炎症

1. 进行免疫原制备以进行免疫接种。
   1. 在免疫接种当天新鲜制备免疫原，将卵清蛋白（OVA，50 mg/mL）和百日咳毒素（100 μg/mL）与佐剂氢氧化铝（40 mg/mL）（参见材料表）以1:1的比例混合。
      谨慎:在层状安全柜中进行百日咳毒素的打开、重构和免疫原制备。穿防护服，避免与皮肤接触。
   2. 将免疫原和佐剂混合物在室温下孵育 30 分钟，然后将 100 μL 上样到 1 mL 注射器中。
   3. 在未麻醉的小鼠中进行免疫原溶液的腹膜内注射。
      1. 轻轻握住鼠标的尾巴，同时抓住笼子网格。用拇指和食指牢牢握住背部皮肤和颈部区域，将无名指和小指之间的尾巴和下肢固定在手掌上。
      2. 保持固定鼠标的头部朝下。
      3. 在下腹腔的右象限或左象限注射 100 μL 制备的免疫原溶液。
2. 免疫接种后 2 周进行眼表激发试验。
   1. 用异氟醚 （2.5%） 麻醉小鼠。
   2. 每只眼睛涂抹 5 μL OVA （50 mg/mL） 或生理盐水 （0.9% NaCl），然后等待滴剂被眼睛吸收。这需要 ~5 分钟。
   3. 每天重复 1 次，持续 7 天。
      注意:药物的局部给药可以以相同的方式进行。

2. 眼部渗出物的收集

1. 通过在攻击后立即向眼睛涂抹 50 μL 无菌盐水来恢复在攻击阶段形成的眼部渗出物。

3. 眼表组织切除

1. 按照以下步骤解剖眼睑和眼球。
   1. 通过 CO₂ 窒息和宫颈脱位对小鼠实施安乐死。
   2. 将鼠标放在平坦的表面上。
   3. 用浸有 70% 乙醇的棉签对眼睛周围的眼眶区域进行消毒。
   4. 在耳朵和眶后窦之间并沿鳞状骨上方的表面垂直切开，沿上颌骨向下眼睑下方水平延伸切口，沿额骨向上眼睑上方延伸切口。这会在眼睛周围形成一个切口（图 1）。
   5. 使用弯曲的镊子小心地握住眼睛周围被解剖的组织，然后将组织和眼球拉出。
   6. 将切除的器官放入无菌 PBS 中。
   7. 使用手术刀和立体显微镜修剪切除的上眼睑周围多余的面部肌肉组织。
2. 按照以下步骤收集结膜。
   1. 将上眼睑放在立体显微镜下的干燥培养皿上。
   2. 使用细镊子和手术刀，非常轻柔地从眼睑内表面剥下白色粘液层。
3. 接下来，按照以下步骤解剖角膜。
   1. 将眼球放在干冰上的新干培养皿上 3 分钟。
   2. 将培养皿以稳定的位置放在工作台面上。
   3. 用细而锋利的剪刀在角膜缘旁边的角膜边缘做一个小切口。
   4. 用手术刀延长眼球周围的切口，将巩膜与角膜分开。
   5. 用生理盐水溶液大量冲洗，去除角膜背面的虹膜和晶状体残留物。

结果

图 1:切除眼眶区域周围的面部组织。切口轨迹以红色表示。这允许切除眼器官并研究各种局部给药疗法对附属眼器官（如结膜和角膜）的影响和作用。

材料