小鼠骨髓来源巨噬细胞对抗体刺激的活化

摘要

来源：Kozicky, L. 等，基于抗体药物对小鼠骨髓和腹腔巨噬细胞活化作用的评估。J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，我们演示了骨髓来源巨噬细胞在细菌脂多糖和静脉注射免疫球蛋白刺激下的活化过程。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 骨髓巨噬细胞的衍生与抗体激活

1. 使用 CO₂ 窒息法实施安乐死。
   1. 将小鼠放入诱导室中，用 5% 异氟烷麻醉 60 - 90 秒，直至小鼠不动且呼吸深而缓慢。
   2. 关闭异氟烷麻醉，以 6 - 8 L/min 的流速通入 CO₂，直至小鼠停止呼吸。继续通入 CO₂ 至少 5 分钟。确认无心跳和呼吸后，实施颈椎脱位以确保死亡。
      注意：8 - 12 周龄的小鼠可获得最高产量的巨噬细胞。
2. 用 70% 乙醇喷洒小鼠腿部，并将其仰卧固定在泡沫板上，四肢伸展。用剪刀和镊子夹住皮肤，在每条后肢表面做浅切口（0.2 cm），去除皮肤和毛发。
   注意：本操作及所有组织培养操作均应在无菌操作台中进行。
3. 修剪肌肉以暴露胫骨和股骨。在髋关节下方和踝关节上方切断骨骼和肌肉，取出胫骨和股骨。尽可能去除附着的肌肉。
4. 用 70% 乙醇喷洒骨骼，静置 1 分钟使其挥发，然后将骨骼放入含骨冲洗培养基（Iscove 改良 Dulbecco 培养基（IMDM），10% 胎牛血清（FBS）....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Iscove 改良的 Dulbecco 培养基（IMDM）	Life technologies	12440053
胎牛血清（FBS）	Life technologies	12483-020
重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）	Stemcell technologies	78059
青霉素-链霉素	Life technologies	15140148
细胞解离缓冲液	Life technologies	13150016	无酶，基于 Hanks 溶液，含 EDTA
脂多糖（LPS）	Sigma aldrich	L 4516	来源于大肠杆菌 E. coli 0127:B8
静脉注射免疫球蛋白（IVIg，Gammunex）	Grifols	由不列颠哥伦比亚儿童医院输血医学科提供
静脉注射免疫球蛋白（IVIg，Gammagard liquid）	Baxter Healthcare Corporation	由不列颠哥伦比亚儿童医院输血医学科提供
静脉注射免疫球蛋白（IVIg，Octagam）	Octapharma	由不列颠哥伦比亚儿童医院输血医学科提供
磷酸盐缓冲液（PBS，无菌），pH 7.4	Life technologies	10010023
小鼠 IL-10 ELISA 试剂盒	BD biosciences	555252
小鼠 IL-12/23p40 ELISA 试剂盒	BD biosciences	555165
15 mL 圆锥形离心管	BD biosciences	352096
50 mL 圆锥形离心管	BD biosciences	352070
微量离心管（1.7 mL）	Diamed	SPE155-N
75 cm2 组织培养处理过的培养瓶	BD biosciences	353136
细胞刮刀	BD biosciences	353085