抗原包被微珠激活后B淋巴细胞中的细胞器动力学

摘要

来源：Ibañez-Vega, J.，等，研究B细胞在免疫突触形成过程中的细胞器动力学。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们介绍了一种研究B淋巴细胞在经抗原包被的微珠激活后细胞器动态变化的方法。

方案

注意：以下步骤使用 IIA1.6 B 细胞进行。

1. 使用抗原包被的微珠激活B细胞

1. 抗原包被微球的制备
   1. 为了激活B细胞，使用NH₂-共价包被抗原的珠粒（Ag-包被珠粒），使用50 µL（约20 × 10⁶）制备⁶ 3 µm NH微珠₂-beads 负载激活性（BCR-配体+）或非激活性（BCR-配体-）抗原。
   2. 对于 IIA1.6 B 细胞，使用抗 IgG-F(ab')₂ 片段作为 BCR-配体+ 和抗 IgM-F(ab')₂ 或使用牛血清白蛋白（BSA）作为BCR配体。要激活原代B细胞或IgM+ B细胞系，请使用抗IgM-F(ab')₂ BCR-配体阳性（BCR-ligand+）和牛血清白蛋白（BSA）作为 BCR-配体阴性（BCR-ligand-）
      注意： 为避免配体与 Fc 受体结合，请使用 F(ab') 或 F(ab')₂ 抗体片段而非全长抗体
   3. 为制备银涂层微珠，将微珠置于低蛋白吸附的微量离心管中，以在样品操作过程中最大限度地回收微珠。加入1 mL 1×磷酸盐缓冲液（PBS）洗....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
IIA1.6（A20 变体）小鼠 B 淋巴瘤细胞	ATCC	TIB-208	来源于 Balb/c 小鼠的鼠源性 B 细胞淋巴瘤，其表面表达含 IgG 的 BCR，但不表达 FcγIIR
100% 甲醇	Fisher Scientific	A412-4
直径 10 mm、厚度 1 号圆形盖玻片	Marienfield-Superior	111500
Amino-Dynabeads	ThermoFisher	14307D
抗中心粒周围蛋白抗体（Anti-pericentrin）	Abcam	ab4448	推荐稀释比例为 1:200，但应进行优化
抗 rab6 抗体（Anti-rab6）	Abcam	ab95954	推荐稀释比例为 1:200，但应进行优化
抗 sec61 抗体（Anti-sec61）	Abcam	ab15575	推荐稀释比例为 1:200，但应进行优化
BSA	Winkler	BM-0150
3.00 μm 聚苯乙烯氨基微球（Polybead Amino Microspheres）	Polyscience	17145-5
聚-L-赖氨酸（Poly-L-Lysine）	Sigma	P8920	用无菌水稀释
RPMI-1640 培养基	Biological Industries	01-104-1A
吐温 X-100（Triton X-100）	Merck	9036-19-5
50 ml 离心管	Corning	353043